谢 芳，刘永利，李树冬，戴斌玉，刘 涛，陈绍军*，邵先舫*

    1.湖南省中医药研究院附属医院，湖南 长沙 410006；2.海口市中医医院，海南 海口 570216；3.湖南中医药大学附属常德医院，湖南 常德 415000

    膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)，是以关节软骨退变、滑膜炎性增生、软骨下骨质硬化以及关节周围骨赘形成为主要病理表现的临床常见退变性疾病[1]。 在KOA 的进展过程中，无菌性炎症既能导致关节的疼痛、肿胀，也是KOA 持续进展的内在因素。机体无菌性炎症反应过程中由趋化因子配体2(CC chemokine ligand 2, CCL2)及其受体(CC chemokine receptor 2, CCR2)介导的免疫应答以及核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)信号通路介导的促炎信号反应发挥了重要作用，而且CCL2/CCR2 信号轴及NF-κB 信号通路也是目前研究KOA 发病机制的重要切入点[2-3]。

    细胞焦亡是由半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)介导的与炎症反应高度相关的细胞程序性死亡方式。 软骨细胞焦亡是关节软骨退变的重要方式之一，抑制软骨细胞焦亡是保护软骨细胞，防治KOA疾病进展的关键所在[4]。 活膝汤是湖南省名中医邵先舫教授根据独活寄生汤加减而来，在临床应用中疗效显著[5]，但活膝汤干预KOA 的分子机制尚未明确。本研究结合目前研究热点及前沿，以软骨细胞焦亡、CCL2/CCR2、NF-κB 信号通路为立足点探讨活膝汤干预KOA 的分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物 选取8 周龄SPF 级雄性Sprague-Dawley 大鼠(体质量200～220 g)32 只。 所有大鼠均购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，合格证号：SCXK(湘)2019-0004。 本实验大鼠在湖南中医药大学SPF 级实验动物中心饲养，室温20～25 ℃，相对湿度55%±5%，空气流通，普通饲料饲养，自由饮食，灯光明暗循环各12 h。 实验过程中遵循湖南中医药大学第一附属医院动物伦理委员会标准，实验已由湖南中医药大学第一附属医院动物伦理委员会批准，批准号：ZYFY20210115。

    1.1.2 实验药物 活膝汤组方(独活15 g，桑寄生15 g，续断 15 g，杜仲15 g，骨碎补 15 g，川牛膝15 g，秦艽10 g，茯苓10 g，细辛6 g，甘草6 g) ......