毛林夕 王梦云 杨皓宇 覃艳 王炜

    〔摘要〕 目的 制備谷胱甘肽(glutathione， GSH)响应的香豆素类荧光探针并应用于中药GSH调节剂的筛选。方法 以香豆素为荧光团，2-氯-5-硝基嘧啶为淬灭基团，构建GSH响应的荧光探针(HCN)，通过紫外、高效液相色谱、荧光光谱和核磁等表征手段确定HCN的结构及其对GSH响应的可行性、特异性、灵敏性，以确定最佳响应条件。通过MTT实验及细胞成像考察HCN的细胞毒性及胞内荧光信号。以GSH商品化消耗剂(NEM)为阳性对照，选取民族药血筒中16种化合物为筛选对象，通过HCN检测所选化合物对GSH水平的调控能力，并进一步采用分子对接手段验证筛选结果的可靠性。结果 核磁谱表明HCN合成成功，能与GSH特异性响应并呈线性关系，且HCN的最佳反应温度和反应时间分别为37 ℃和100 min。MTT实验表明，在HepG2细胞中，与0 μmol/mL相比，80 μmol/mL和100 μmol/mL的HCN降低了细胞活力(P<0.05)，说明HCN对HepG2细胞增殖有影响；在HL-7702细胞中，与0 μmol/mL相比，各浓度HCN对细胞活力影响微弱(P>0.05)，说明HCN对HL-7702细胞增殖无影响。在细胞成像实验中，与0 μmol/mL相比，各浓度HCN的荧光强度增强(P<0.05)。在药物筛选中，与control相比，血筒中的化合物五内酯B、南五内酯和异南内酯A下调了GSH的水平(P<0.001，P<0.05)。分子对接结果表明，血筒中的化合物五内酯B、南五内酯和异南内酯A与GSH形成了2个及以上的氢键，结合能分别为-3.94、-3.64、-4.87 kal/mol。结论 本文设计合成了一种GSH响应的香豆素类探针HCN，HCN具有良好的GSH响应特异性、灵敏性、光稳定性及低细胞毒性等特点，能应用于中药GSH调节剂的筛选 ......