李 玲，李 点*，张 婷，姚 蕾，李 炎

    1.湖南中医药大学中医学院，湖南 长沙 410208；2.湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007

    干眼为多种因素引起的慢性眼表疾病，是由泪液的质、量及动力学异常导致的泪膜不稳定或眼表微环境失衡，可伴有眼表炎性反应、组织损伤及神经异常，造成眼部多种不适症状和(或)视功能障碍[1-3]。常以眼干燥感、异物感、灼烧感、疲劳感和视力波动等眼部不适为临床表现。目前，有大样本研究调查发现，近年来干眼的发病率呈现上升的趋势，且人群趋于低龄化[4-5]。 研究表明，炎症是干眼发生发展的核心机制之一，眼表炎症与泪液渗透压升高具有显著相关性[6]。 而中医学认为干眼的病机大多以肝肾不足，津液亏虚，目失润养为主。 以“补养肝肾”为组方原则的养阴润目丸是湖南中医药大学第一附属医院眼科治疗干眼的院内制剂，已在临床安全、有效地使用多年[7-8]。 本研究以苯扎氯铵溶液诱导的干眼兔为研究对象，旨在探究养阴润目丸对干眼兔结膜上皮细胞焦亡的干预作用和疗效机制，为中医药治疗干眼提供新的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 健康普通级新西兰兔40 只，雌雄各半，体质量1.5～2.5 kg，购自湖南中医药大学动物实验中心(合格证号：SZ-20190826-雄性、SZ-20190821-雌性)，动物实验伦理审批号：LLBH-202007310001。对所有实验兔进行排查，选择泪液分泌量正常、泪膜破裂时间(break up time, BUT)正常、裂隙灯检查无眼疾者纳入实验。饲养于湖南中医药大学实验动物中心，相对湿度为50%～55%，实验室室温为21～26 ℃，1 笼1 兔，自由饮食，环境干净整洁、安静。 普通级兔用饲料自由取食。

    1.1.2 药物制备 养阴润目丸为院内制剂，由生地黄、当归、枸杞子、沙参、白芍、黄精、石斛、牡丹皮、菊花、黄芪和甘草组成，规格为1 g 丸剂，相当于8.4 g生药。 成人用药方法：10 g/次，1 天2 次。 备案号：湘药制备字Z20210461000，由湖南中医药大学第一附属医院药剂科提供。

    1.1.3 主要试剂及仪器 2%荧光素钠(批号：XY19118)、0.1%苯扎氯铵溶液(批号：H20063993)均购自广州明兴制药厂；泪液检测滤纸条(天津晶明新技术开发有限公司，批号：0102)；白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)ELISA 试剂盒(批号：E-EL-M0055c)、白细胞介素-18(interleukin-18, IL-18)ELISA 试剂盒(批号：E-EL-M0062c)均购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司；β-actin 抗体(批号：AG07197903)、NOD 样受体家族核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NOD-like receptor family pyrin domain-con taining protein 3, NLRP3)抗体(批号：AI10305354)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteine aspartate-specific proteinase-1, Caspase-1)抗体(批号：BA03228585)、消化道皮肤素D(Gasdermin D, GSDMD)抗体(批号：BA03226742)、山羊抗兔IgG(批号：BJ08079044)均购自北京博奥森生物技术有限公司 ......