鸡软骨Ⅱ型胶原蛋白的提纯与鉴定
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【摘要】目的探讨可溶性Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)的提纯方法。方法 以雏鸡胸软骨为原材料,酸性条件下经胃蛋白酶消化,离心后,应用DEAE-Sephadex A-50进行离子交换层析,透析,盐析,得到纯化的CⅡ。 结果自提的CⅡ样品与CⅡ标准品采用SDS-PAGE电泳显示条带一致。结论本法提纯CⅡ具有材料丰富,操作简便,重复性好等优点。
【关键词】 Ⅱ型胶原蛋白 提取 纯化
【中图分类号】 R3【文献标识码】 A【文章编号】 1674-0742(2011)03(a)-0052-02
胶原蛋白是结缔组织的重要成分之一,分20余种,其中CⅡ主要存在于软骨基质,占软骨干重的一半以上,研究表明类风湿关节炎(RA)的发病与CⅡ的自身免疫反应有关,国内外均于口服CⅡ诱导免疫耐受治疗RA的相关报道[1～3],该方法有可能成为安全、简便、有效的新型治疗方法。因此,CⅡ的提纯是我们研究此方法的重要前提,目前国内外文献的报道中多采用盐酸胍来粗提胶原蛋白[4～5],盐酸胍是一种蛋白质变性剂且有一定的毒性,如果在提纯的过程中不能被完全清除,在一定程度上会限制CⅡ的临床应用。本试验参照Trentham[6]及Miller[7]等方法,用胃蛋白酶法提取,操作简便,重复性好,且提取的CⅡ安全性大。
1临床资料
1.1一般资料
鸡胸软骨:取材于孵化场17d的雏鸡。CⅡ:Sigma公司(来源于鸡),5mg/瓶。
1.2主要仪器
离心机(日立高速冷冻离心机);层析柜(LKB2023,BROMMA minicoldlab)。
1.3主要试剂
胃蛋白酶(Sigma 5g/瓶);DEAE-Sephadex A 50(Amersham);Tris(sigma 100g/瓶) ......
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