免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体对类风湿性关节炎的诊断价值
[摘要] 目的 探讨免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体对于类风湿性关节炎患者的诊断价值，比较两种方法的不同，为临床上正确诊断提供依据。方法 采用免疫金银染色法和免疫荧光法分别检测48例类风湿性关节炎患者和48例正常对照者血清中的抗角质蛋白抗体。结果 免疫金银染色法和免疫荧光法对于抗角质蛋白抗体检测的阳性率为:病例组分别为72.91%和52.08%，对照组为0和0；两种方法对于抗角质蛋白抗体的检测，其特异度都很高，两者间比较差异无统计学意义(P>0.05)；但是在诊断的敏感度及正确率方面，免疫金银染色法好于免疫荧光法，两者间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体对于类风湿性关节炎患者的诊断价值较高，其敏感度和特异度都较高，在临床上，可以采用免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体，其对于类风湿性关节炎的辅助诊断更有意义。
[关键词] 免疫金银染色法；免疫荧光法；抗角质蛋白抗体；类风湿性关节炎
[中图分类号] R684 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2012)09(a)-0178-02
, 百拇医药
类风湿性关节炎是一种以关节滑膜炎为主要特征的自身免疫性疾病[1]，目前，其发病率有升高的趋势，本文主要探讨免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体对于类风湿性关节炎患者的诊断价值，为临床上正确诊断提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2009年10月—2011年6月在本院进行治疗的48例类风湿性关节炎(病例组)及同期进行健康体检的48例正常受试者(对照组)，两组受试对象的一般情况如下：病例组：男性有26例，女性22例，年龄在14~56岁，平均年龄为28.9岁；所有患者均有不同程度的手或其它单关节疼痛史，经X线诊断均有骨质疏松的表现。对照组：男性25例，女性23例，年龄在15~54岁，平均年龄为29.2岁，所有患者X线检测正常。经比较，两组患者的年龄、性别基本一致，差异无统计学意义(P>0.05)。
, 百拇医药 1.2 试剂及材料
1.2.1 血清标本 主要包括有48例类风湿性关节炎患者的血清样本和48例正常对照者的血清样本。
1.2.2 试剂 角质蛋白抗原；用荧光标记的羊抗人IgG抗体、兔抗人IgG抗体。
1.3 方法
1.3.1 免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体 在室温中对大鼠食管抗原片进行复温(30 min)，用TBS清洗15 min，进行封闭(15 min)，加入上述血清标本(按照1∶10进行稀释)，反应1h，随后用TBS清洗3次，每次5 min，加入金标记兔抗人IgG抗体，按照1∶20 进行稀释，1 h后，再用TBS清洗3次，每次5 min，清洗完毕后用硝酸银进行显色反应，最后用去离子水进行冲洗观察。
1.3.2 免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体 在室温中对大鼠食管抗原片进行复温(30 min)，加入上述血清标本(按照1∶10进行稀释)，反应30 min，用PBS清洗3次，随后加入荧光工作液反应30 min后，再有PBS清洗3次。在荧光显微镜下进行观察。
, 百拇医药
1.4 判断方法
1.4.1 免疫金银染色法 若大鼠食管的角质层显示为黑色时，可以判断为阳性结果，若不显色则可以判断为阴性结果[2]。
1.4.2 免疫荧光法 若在大鼠食管角质层可见有黄绿色特异性的荧光时，可以判断为阳性结果；若没有则可以判断为阴性结果[2]。
1.5 统计方法
计算两种方法对于抗角质蛋白抗体检测的阳性率，比较两种检测方法的灵敏度、特异性及正确率等，对于两种方法检测同一血清阳性率进行比较时，采取Fisher精切概率法，对于不同血清样本的阳性率比较时采取χ2检验进行，统计软件应用SPSS13.0进行分析。
2 结果
2.1 免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体的阳性率
, http://www.100md.com
病例组48例血清样本中，有35例样本检测结果为阳性，占72.91%；对照组48例血清样本中，没有检测出阳性结果；病例组的阳性率高于对照组，两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，具体结果见表1。
2.2 免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体的阳性率
病例组48例血清样本中，有25例样本其为阳性结果，占52.08%；对照组48例血清样本中，没有检测出阳性结果；病例组的阳性率高于对照组，两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，具体结果见表1。
2.3 两种方法的灵敏度、特异度、准确率等比较
免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体对于诊断类风湿性关节炎的特异度、灵敏度、准确率、阳性预测值及阴性预测值比较，两种方法的特异度、阳性预测值及阴性预测值基本一致，差异无统计学意义(P>0.05)；而在诊断的敏感度及正确率方面，免疫金银染色法好于免疫荧光法，两者间比较，差异有统计学意义(P<0.05)，具体结果见表2。
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表2 两种方法的诊断结果比较
3 讨论
类风湿性关节炎也称为类风湿，是一种慢性全身性疾病，其主要的临床表现为对称性、多滑膜关节炎，是自身免疫性疾病的一种，其发病原因尚未阐明，目前临床上对于其进行诊断主要是根据临床表现，X线检查及类风湿因子，但是类风湿性关节炎患者的临床表现并不典型，容易造成漏诊[3]；X线对于早期病变不易发现；类风湿因子是对其进行诊断的唯一的血清检测指标，其灵敏度较高，但是特异度较低，不适合于早期诊断[3]，而目前临床上通过检测抗角质蛋白抗体，来辅助诊断类风湿性关节炎，有研究报道抗角质蛋白抗体不仅与类风湿性关节炎的病情严重程度有关，同时在疾病的早期，甚至可以早于临床症状而表现为阳性结果，可以作为类风湿性关节炎的早期诊断指标[3]。
对于抗角质蛋白抗体的检测，目前较多的采用免疫荧光法，但是此类方法的灵敏度较低，容易造成假阳性结果，而且在不同实验室其操作具体条件不同，得到的结果很难进行统一[4]；而免疫金银染色法的灵敏度较高，主要是通过用金标记的抗体对于血清中的抗角质蛋白抗体进行检测，同时可以应用普通的光学显微镜进行观察，使其应用较为广泛[4]。
, http://www.100md.com
本次研究中，两种检测方法对于类风湿性关节炎的诊断阳性率远远高于正常对照者，表明检测受试者血清中的抗角质蛋白抗体对于类风湿性关节炎的诊断具有重要的意义；两种方法诊断的特异度、阳性预测值及阴性预测值基本一致，而在诊断的敏感度及正确率方面，免疫金银染色法好于免疫荧光法，说明免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体对于辅助诊断类风湿性关节炎的价值更大。
[参考文献]
[1] 李鸿斌,李小峰,甘晓丹,等.抗核周因子等四种抗体联合检测在早期类风湿关节炎诊断中的意义[J].中华医学杂志,2000(1):20.
[2] 艾脉兴,曾小峰.类风湿关节炎自身抗体的新认识[J].中华风湿病学杂志,2002,6(3):195-197.
[3] 曾小峰,张丽君.抗聚角蛋白微丝蛋白抗体的检测在类风湿关节炎诊断中的意义[J].中华风湿病学杂志,2002,6(3):157-160.
[4] Lapin SV,MaslianskiǐAL, MazurovVI, et al.Comparative char-acteristics of specific autoantibodies in rheumatoid arthritis[J].TerArkh, 2005, 77(12):53-59.
(收稿日期：2012-07-19), http://www.100md.com(齐朝阳 郭丽平 李勇)
[关键词] 免疫金银染色法；免疫荧光法；抗角质蛋白抗体；类风湿性关节炎
[中图分类号] R684 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2012)09(a)-0178-02
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类风湿性关节炎是一种以关节滑膜炎为主要特征的自身免疫性疾病[1]，目前，其发病率有升高的趋势，本文主要探讨免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体对于类风湿性关节炎患者的诊断价值，为临床上正确诊断提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2009年10月—2011年6月在本院进行治疗的48例类风湿性关节炎(病例组)及同期进行健康体检的48例正常受试者(对照组)，两组受试对象的一般情况如下：病例组：男性有26例，女性22例，年龄在14~56岁，平均年龄为28.9岁；所有患者均有不同程度的手或其它单关节疼痛史，经X线诊断均有骨质疏松的表现。对照组：男性25例，女性23例，年龄在15~54岁，平均年龄为29.2岁，所有患者X线检测正常。经比较，两组患者的年龄、性别基本一致，差异无统计学意义(P>0.05)。
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1.2.1 血清标本 主要包括有48例类风湿性关节炎患者的血清样本和48例正常对照者的血清样本。
1.2.2 试剂 角质蛋白抗原；用荧光标记的羊抗人IgG抗体、兔抗人IgG抗体。
1.3 方法
1.3.1 免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体 在室温中对大鼠食管抗原片进行复温(30 min)，用TBS清洗15 min，进行封闭(15 min)，加入上述血清标本(按照1∶10进行稀释)，反应1h，随后用TBS清洗3次，每次5 min，加入金标记兔抗人IgG抗体，按照1∶20 进行稀释，1 h后，再用TBS清洗3次，每次5 min，清洗完毕后用硝酸银进行显色反应，最后用去离子水进行冲洗观察。
1.3.2 免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体 在室温中对大鼠食管抗原片进行复温(30 min)，加入上述血清标本(按照1∶10进行稀释)，反应30 min，用PBS清洗3次，随后加入荧光工作液反应30 min后，再有PBS清洗3次。在荧光显微镜下进行观察。
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1.4 判断方法
1.4.1 免疫金银染色法 若大鼠食管的角质层显示为黑色时，可以判断为阳性结果，若不显色则可以判断为阴性结果[2]。
1.4.2 免疫荧光法 若在大鼠食管角质层可见有黄绿色特异性的荧光时，可以判断为阳性结果；若没有则可以判断为阴性结果[2]。
1.5 统计方法
计算两种方法对于抗角质蛋白抗体检测的阳性率，比较两种检测方法的灵敏度、特异性及正确率等，对于两种方法检测同一血清阳性率进行比较时，采取Fisher精切概率法，对于不同血清样本的阳性率比较时采取χ2检验进行，统计软件应用SPSS13.0进行分析。
2 结果
2.1 免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体的阳性率
, http://www.100md.com
病例组48例血清样本中，有35例样本检测结果为阳性，占72.91%；对照组48例血清样本中，没有检测出阳性结果；病例组的阳性率高于对照组，两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，具体结果见表1。
2.2 免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体的阳性率
病例组48例血清样本中，有25例样本其为阳性结果，占52.08%；对照组48例血清样本中，没有检测出阳性结果；病例组的阳性率高于对照组，两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，具体结果见表1。
2.3 两种方法的灵敏度、特异度、准确率等比较
免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体对于诊断类风湿性关节炎的特异度、灵敏度、准确率、阳性预测值及阴性预测值比较，两种方法的特异度、阳性预测值及阴性预测值基本一致，差异无统计学意义(P>0.05)；而在诊断的敏感度及正确率方面，免疫金银染色法好于免疫荧光法，两者间比较，差异有统计学意义(P<0.05)，具体结果见表2。
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表2 两种方法的诊断结果比较
3 讨论
类风湿性关节炎也称为类风湿，是一种慢性全身性疾病，其主要的临床表现为对称性、多滑膜关节炎，是自身免疫性疾病的一种，其发病原因尚未阐明，目前临床上对于其进行诊断主要是根据临床表现，X线检查及类风湿因子，但是类风湿性关节炎患者的临床表现并不典型，容易造成漏诊[3]；X线对于早期病变不易发现；类风湿因子是对其进行诊断的唯一的血清检测指标，其灵敏度较高，但是特异度较低，不适合于早期诊断[3]，而目前临床上通过检测抗角质蛋白抗体，来辅助诊断类风湿性关节炎，有研究报道抗角质蛋白抗体不仅与类风湿性关节炎的病情严重程度有关，同时在疾病的早期，甚至可以早于临床症状而表现为阳性结果，可以作为类风湿性关节炎的早期诊断指标[3]。
对于抗角质蛋白抗体的检测，目前较多的采用免疫荧光法，但是此类方法的灵敏度较低，容易造成假阳性结果，而且在不同实验室其操作具体条件不同，得到的结果很难进行统一[4]；而免疫金银染色法的灵敏度较高，主要是通过用金标记的抗体对于血清中的抗角质蛋白抗体进行检测，同时可以应用普通的光学显微镜进行观察，使其应用较为广泛[4]。
, http://www.100md.com
本次研究中，两种检测方法对于类风湿性关节炎的诊断阳性率远远高于正常对照者，表明检测受试者血清中的抗角质蛋白抗体对于类风湿性关节炎的诊断具有重要的意义；两种方法诊断的特异度、阳性预测值及阴性预测值基本一致，而在诊断的敏感度及正确率方面，免疫金银染色法好于免疫荧光法，说明免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体对于辅助诊断类风湿性关节炎的价值更大。
[参考文献]
[1] 李鸿斌,李小峰,甘晓丹,等.抗核周因子等四种抗体联合检测在早期类风湿关节炎诊断中的意义[J].中华医学杂志,2000(1):20.
[2] 艾脉兴,曾小峰.类风湿关节炎自身抗体的新认识[J].中华风湿病学杂志,2002,6(3):195-197.
[3] 曾小峰,张丽君.抗聚角蛋白微丝蛋白抗体的检测在类风湿关节炎诊断中的意义[J].中华风湿病学杂志,2002,6(3):157-160.
[4] Lapin SV,MaslianskiǐAL, MazurovVI, et al.Comparative char-acteristics of specific autoantibodies in rheumatoid arthritis[J].TerArkh, 2005, 77(12):53-59.
(收稿日期：2012-07-19), http://www.100md.com(齐朝阳 郭丽平 李勇)