表皮生长因子受体突变在晚期非小细胞肺癌靶向治疗中的临床价值研究(2)
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1 资料与方法
1.1 一般资料
选取32 例经铂类治疗方案失败的晚期 NSCLC 患者，入选对象均知情同意。在32例晚期 NSCLC 患者中，男20例，女12例，年龄在45～72岁之间，平均年龄为(63.16±5.81)岁。所有患者经组织学检查均诊断为局部晚期NSCLC或转移NSCLC，均无法进行手术治疗。入选标准：①参考RECIST标准，患者≥1个可测量病灶；②预计生存期超过3个月者；③在1个月内未接受抗肿瘤治疗者。排除标准：①心、肝、肾功能不全者；②骨髓造血功能缺损者。
1.2 方法
患者口服getfinibi 250 mg /片，1次/d。根据患者病情变化，适当调整剂量，直到患者出现不能耐受的毒性。
1.3 EGFR 酪氨酸激酶域基因突变检测
1.3.1 仪器与试剂 仪器为TGL-16G 低温高速离心机(上海安亭科学仪器厂生产)与ERICOMP 公司生产的PCR 仪。试剂为EGFR、APES(美国SIGMA 公司生产)、细胞基因组DNA 提取试剂盒(上海生物工程股份有限公司提供)、TaqDNApolymerase(大连宝生物工程有限公司提供)、DNA 凝胶回收试剂盒(广州博亚公司提供)。
1.3.2 基因组DNA 提取 标本采用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋与连续性切片时，每换一个石蜡块时均要彻底清洁切片机。标本切8～10 张，切片厚度为10 μm，分别装在2 个消毒的l.5 mL EP 管中。然后置于组织的EP管离心5 s，加入l mL二甲苯，振荡30 min，以速率为12 000 r/min离心5 min，去上清，重复3～5 步。然后加入1 mL 100%乙醇，混匀，以速率为12 000 r/min离心5 min，将乙醇吸出，自然风干，最后采用细胞基因组DNA 提取试剂盒提取基因组DNA。
将200 μL TE与400 μL消化缓冲液加到干燥后的标本中，混匀，然后加入蛋白酶K 6～12 μL。以速率为12 000 r/min离心5 min，去上清，并在上清中加入260 μL无水乙醇混匀，然后将液体转移到UNIQ-10 柱，以速率为8 000 r/min离心30 s ......
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