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编号:13642377
大鼠骨髓间质干细胞的体外分离培养与鉴定(2)
http://www.100md.com 2015年5月15日 《中外医疗》 201514
     1.4 流式细胞仪检测细胞表面标记

    收集第3代细胞,调整细胞密度为1.0×106个/ mL,装入1.5 mL的EP管中,每管1 mL,1100 r/min离心4 min,弃上清。每管加入100 μL PBS,混匀,分别加入CD29-FITC、CD44- FITC、CD45- PE-Cy5兔抗大鼠单克隆抗体1 μL(0.5~1 μg/106细胞),混匀。37 ℃避光孵育20 min后,每管加入1 mL PBS,1100 r/min离心4 min,弃上清,再重复洗2遍,以除去未结合抗体。0.5 mL PBS 重悬细胞,流式细胞仪进行检测分析。同时每管样品设立同型阴性对照。

    1.5 体外诱导大鼠BMSCs 成骨和成脂分化

    1.5.1 成脂分化及油红O染色鉴定 取第3代的大鼠BMSCs接种于六孔板,加入含1 umol/L的地塞米松,0.5 mmol/L的3-异丁基-1-甲基黄嘌呤,10 mg/L的牛胰岛素,100 mmol/L的消炎痛(indomethncin),10%FCS的H-DMEM诱导3 d ......
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