1.4 RT-PCR检测

    裂解细胞提取RNA，逆转录为cDNA，利用试剂盒进行RT-PCR，以β-actin为内参，每组实验重复3次。

    1.5 流式细胞术检测细胞凋亡

    SK-Hep-1和Huh-7细胞转染72 h后，洗涤并离心，加入195 μL Annexin-V结合液重悬细胞、6μL Annexin-V、4 μL PI，室温避光孵育20 min，立即进行流式细胞术进行检测。

    1.6 统计方法

    采用SPSS 20.0统计学软件进行统计分析数据，两组间比较采用配对t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 SIRT6在肝癌细胞系中的表达

    经RT-PCR和Western blot结果显示，SIRT6在4个肝癌细胞系中的mRNA和蛋白质水平较永生化肝细胞系MIHA明显升高，见图1、2。

    2.2 慢病毒介导的shRNA对SIRT6的抑制作用

    将表达shSIRT6的慢病毒感染Huh-7细胞 ......