产前抑郁症与生物钟基因表达水平的相关性研究(2)
1.4 引物的合成与设计参照NCBI数据库中Clock、PER1和β-actin的mRNA序列,使用OligoAnalyzer 3.1进行PCR引物设计,由大连宝生物公司合成引物,引物信息见表1。
1.5 实时定量PCR反应体系
以反转录得到的cDNA为模板,使用StepOnePlus? Real-Time PCR System(美国Applied Biosystems Inc公司),PCR反应体系为25 μL:cDNA 2 μL(相当于100 ng),2× SYBR Premix Ex TaqTMⅡ×12.5 μL,10 μmol/L上游引物0.5 μL,10 μmol/L下游引物0.5 μL,双蒸水9.5 μL。反应条件:95 ℃变性5 min;扩增40个循环(95 ℃变性10 s,60 ℃退火延伸45 s);72 ℃放置5 min。
1.6 统计方法
使用SPSS 19.0统计学软件进行数据统计,以目的基因与参比基因Ct值差值作为相对表达水平的评价指标 ......
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