何娅玲

    复旦大学生命科学学院，上海 200433

    埃可病毒又称人肠道致细胞病变孤儿病毒(enteric cytopathogenic human orphan virus，ECHO)，属于小 RNA病毒科肠道病毒属B组，最早由无菌性脑膜炎患儿粪便中分离获得[1]。临床研究显示埃可病毒感染可导致无菌性脑膜炎、婴儿腹泻等多种疾病,在世界各地人群中散发或流行[2]。对上海水质调查中发现EC30是一种常见的病原[3]。2014年，浙江宁波市郊区出现了由EC30引起的家族式脑膜炎爆发，造成了巨大的社会影响[4]。尽管该类病毒危害较大，但是尚无特效药物用以治疗，也未有预防性疫苗[5]。

    肠道病毒属的病毒成员庞杂，病毒颗粒均呈裸露无包膜的球形，直径约24～30 nm，由衣壳和单正股RNA组成[6]。感染人类的可分为A～D 4类[7]，其中也包括手足口病的主要致病原，肠道病毒A类的人肠道病毒 71 型(human Enterovirus 71，EV71)等。 该研究借鉴EV71病毒培养纯化经验，使用RD细胞作为EC30生产细胞。在RD细胞中接种EC30并扩大培养，利用蔗糖密度梯度离心的方法分离、纯化病毒。SDS变性蛋白电泳检测发现目的产物纯度较高，随后用透射电镜观察发现目的产物为20～30 nm大小的球状颗粒。这些均提示纯化产物纯度较高、具有完整的病毒颗粒结构。此外，该病毒颗粒蛋白可在优化条件下成功生长成蛋白晶体，为后续的病毒结构功能研究和疫苗研发建立了坚实的基础，现报道如下。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料

    RD细胞购自ATCC细胞库；哺乳动物细胞培养基包括DMEM High Glucose培养基购自Gibco公司；胎牛血清、青霉素链霉素双抗溶液购自HyClone公司；蛋白质浓度测定试剂盒购自BIO-RAD公司；病毒颗粒纯化与浓缩、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳等实验相关试剂与材料购自AMERSCO、Millipore、国药集团等公司；负染色电镜样品制备相关材料购自中镜科仪；晶体培养条件筛选使用Hampton crystallization kits ......