Hdm2剪接体促进结直肠癌细胞增殖的分子机制

Hdm2剪接体促进结直肠癌细胞增殖的分子机制(2)

http://www.100md.com 2018年10月25日《中外医疗》 2018年第30期

     1.2.2 构建质粒与转染构建Myc或Flag标签的Hdm2和Hdm2-S质粒。质粒克隆均以细胞cDNA作为模板，利用高保真Pfu DNA 聚合酶(Agilent， Ultra II)进行PCR，使用的内切酶购于NEB公司。自行构建质粒克隆引物如下。

    Myc-Hdm2：

    F(BamH1)：5'-CGGGATCCCGATGGAACAGAAAC TGATCTCTGAAGAAGACCTGATGTGCAATACCAACAT GTCT GTACCTACTG-3'

    R(EcoR1)：5'-CCGGAATTCCGGCTAGGGGAAATA AG TTAGCACAATC-3'

    Flag- Hdm2-S

    F(BamH1)：5'-CGGGATCCCGATGGAGCGGTTAGGAGAGAA-3'

    R(EcoR1)：5'-CCGGAATTCTCAGTTATAGAATGAT TTCT-3'

    SW1116细胞长到80%～90%时 ......

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