太白山藤梨根提取物对人喉癌细胞HeP—2生长抑制作用分析(2)
1 材料与方法1.1 细胞及试剂来源
人喉癌HeP-2细胞株购于南京凯基公司,细胞常规培养于RPMI-1640培养基(含10%胎牛血清)中(小牛血清购于华美生物工程公司;RPMI-1640培养基为Gibco产品),体积分数为50 mL/L CO2,37℃,饱和湿度。
藤梨根购于陕西恒庆医药有限公司(产品批号:060516),阴干后粉碎成粗粉,95%乙醇浸泡24 h(乙醇与藤梨根体积比为6:1),加热回流提取6次,浓缩后伴入硅藻土(1:1),干燥,真空抽干,研碎成粉末,经氯仿回流提取。将提取物用生理盐水进行配置。
1.2 方法
1.2.1 细胞增殖率测定 将对数生长期的HeP-2细胞经胰蛋白酶(购于Amresco公司)消化后接种于24孔培养板,使用计数法测定细胞增殖情况,并根据公式计算细胞群体倍增时间。细胞群体倍增时间=t×lg2/(LgNt-lgNo),t为细胞处于对数生长期的培养时间,Nt为对数生长期的终止细胞数,No为对数生长期的起始细胞数。
1.2.2 MTT法检测细胞活性 MTT(四甲基噻唑蓝)为美国Sigma公司产品。取对数生长期的HeP-2细胞,消化后(胰蛋白酶)接种于96孔培养板(浓度1×106个/L),24 h后细胞贴壁,加入2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 lg μmol/L的藤梨根提取物,对照组加入等体积RPMI-1640培养液 ......
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