程小平，沈定霞，罗燕萍，周 光，陈 荣，权秋宁

    (1、南昌大学第一附属医院检验科，江西 南昌 330006；2、中国人民解放军总医院微生物科；3、南昌大学医学院06级检验系)

    铜绿假单胞菌mexA基因的克隆及其序列分析

    程小平1，沈定霞2*，罗燕萍2，周 光2，陈 荣2，权秋宁3

    (1、南昌大学第一附属医院检验科，江西 南昌 330006；2、中国人民解放军总医院微生物科；3、南昌大学医学院06级检验系)

    目的 克隆铜绿假单胞菌临床菌株mexA基因并进行序列分析。 方法 从临床分离多重耐药的铜绿假单胞菌抽提DNA，经PCR扩增出mexA基因与PUC18克隆载体连接，对重组质粒进行测序验证。 结果 成功地克隆了mexA基因，重组质粒(PUC/mexA)经测序与Genebank检索的mexA基因序列进行对比证实为99.9%同源 。 结论 所构建的铜绿假单胞菌临床菌株mexA基因克隆适于进一步的克隆表达。

    铜绿假单胞菌，mexA基因，克隆，序列分析

    近年来的研究发现，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)内存在着多种主动外排系统，该系统能够主动将扩散进细菌细胞中的抗菌药物泵出细胞外，从而使细菌获得耐药性。进一步研究表明，PA对碳青酶烯类抗生素的高度耐药与其存在的主动外排系统密切相关[1]。随着新的主动外排系统陆续被发现及其在临床主要病原菌耐药中的重要作用不断被揭示和认同，主动外排系统成为目前细菌耐药机制研究中的新热点[2]。目前已明确的导致铜绿假单胞菌多重耐药性的主动外排泵系统共分为：MexAB-OprM[3]，MexCD-OprJ[4]，MexEF-OprN[5]，MexXY-OprM[6]，MexJK-OprM[7]，MexGHI-OprJ[8]，MexVW-OprM[9]。MexAB-OprM在所知的多药外排泵中具有最广的底物特异性，包括β-内酰胺类和β-内酰胺酶抑制剂、氟喹诺酮类、四环素、氯霉素、大环内酯类、新生霉素类、磺胺类及甲氧苄氨嘧啶。为了构建基因工程抗体，本文从临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌扩增和克隆出mexA基因，并测定和分析了其全部核苷酸序列，现报告如下。

    材料与方法

    1 材料

    1.1 菌株与质粒标准菌株 ：P.ueruginosa PAO4290 lue-10 ......