张立平

    (溧水县人民医院检验科，江苏 南京 211200)

    目前异丙酚的脑保护研究主要以神经元为对象，有关异丙酚对胚胎中脑神经细胞缺氧复氧损伤的影响报道较少。异丙酚是临床十分常用的麻醉镇静药[1，2]，有研究显示异丙酚具有一定的脑保护作用[3]。本实验旨在进一步研究异丙酚干预胚胎中脑神经细胞后缺氧复氧损伤神经细胞形态、乳酸脱氢酶、脂质过氧化的影响,进一步说明异丙酚对脑缺血再灌注损伤有保护作用，为异丙酚在临床上的进一步应用提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 14d胚胎大鼠，体重为250～300g(江苏大学实验动物中心提供)。

    1.2 主要试剂和仪器 小牛血清(杭州四季青生物公司)；DMEM培养基为(美国Sigma公司)；异丙酚由暨南大学生物工程研究所提供(纯度>95%)；MTT(武汉博士德生物工程有限公司)；乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成生物工程研究所)；CO2培养箱为(Forma Scientific，USA)；ELx800 酶标仪 (美国 BIO-TEK公司)。IX70-S8F/SIF-141倒置相差显微镜(Olympus公司,日本)；GNL-B3氧量分析仪(上海昶艾电子科技有限公)； 95%N2-5%CO2混合气平衡过的单向气流缺氧装置(苏州安创仪器有限公司)。

    1.3 胚胎中脑神经细胞的制备 用脱颈椎法处死妊娠14 d孕鼠，在无菌条件下分离出胎鼠中脑，浸入37℃的胎牛血清。 Hanks平衡液(1:1v/v)5～10min，用Hanks液漂洗3次后，用0.25%胰蛋白酶消化10min，加入小牛血清终止消化后经200目钢丝网筛过滤，离心洗去胰蛋白酶。加入DMEM培养液(内含50U/ml的青霉素，50μg/ml的链霉素和15%小牛血清)制备细胞悬液，计数细胞存活率，采用台盼蓝计数活细胞。结果活细胞率为90%，再用含10%小牛血清的DMEM培养基将细胞密度调整至3×105个细胞/ml的细胞，将细胞悬液接种于培养板中，置37℃、5%CO2、95%空气饱和湿度培养箱中培养,细胞培养24h后进行后续试验。

    1.4 胚胎中脑神经细胞缺氧损伤模型的建立 取培养24小时的神经细胞，用15%胎牛血清DMEM培养基连续培养,(预先充入95%N2-5%CO2混合气和30min)，而后迅速将培养细胞移入同种95%N2-5%CO2混合气平衡过的单向气流缺氧装置,测氧仪监测排气口氧浓度(<1%)，于37℃电热恒温培养箱中缺氧6h后进行MTT实验及生化指标的测定 ......