刘 川综述，宁 安审校

    (1、南昌大学第二附属医院；2、江西省寄生虫研究所 330006)

    1 概述

    人类白细胞抗原(HLA)基因位于第6号染色体短臂6P21.3区，是已知人类基因组中基因最丰富的一个区域，至少包括239个基因座[1]。HLA分型已用于组织配型，器官移植、疾病相关性研究、人类学和法医学等领域。HLA分型过去主要采用血清学和细胞学方法，随着PCR技术，基因芯片技术等分子生物学技术的发展，已建立了从DNA水平上进行分型的HLA基因分型技术。我们对近年来出现的几种HLA基因分型方法作一概述。

    2 方法

    2.1 PCR-SSOP(序列特异性寡核苷酸探针)

    PCR-SSOP是以核酸杂交为基础的分型技术。其原理是：先对HLA的多态区域进行扩增，在扩增过程中对PCR产物进行同位素或非同位素标记，然后针对PCR扩增产物根据碱基配对原则设计系列寡核苷酸探针固定在膜上，最后将PCR产物与膜上的探针杂交、放射自显影根据信号判断结果。该方法灵敏度非常高，1个碱基的差异都能被检测出来[2]。

    PCR-SSOP技术用于HLA分型主要包括正相SSOP方法和反相 SSOP方法两种。前者是将PCR产物固定在膜上，用标记的探针与之进行杂交，后者是将特异性探针固定在膜上， 用标记的PCR产物与之杂交[3]。目前广泛采用的是反相 SSOP方法。它特别适合于大批量实验，如在脐血库和骨髓库HLA分型中作为首选的方法。与传统方法相比较，PCRSSOP法具有灵敏度高、特异性强、需样品量少等优点。它不象电泳技术那样，在鉴定不同系列凝胶中DNA片段的精确大小时，存在误差等问题，因此可用于其它技术不易分辨的等位基因的检测及位点的鉴定。到目前为止。各国学者设计的探针，可用于检测几乎所有目前所知HLA等位基因。

    2.2 PCR-RFLP(限制性片段长度多态性)

    九十年代初随着PCR方法与之结合，该方法得到普遍推广。其原理是：HLA特异等位基因内部存在多个核酸内切酶位点，由于不同的HLA特异等位基因之间存在着核苷酸的差异，用相同的限制性核酸内切酶去消化这些特异性等位基因的差异位点，会得到不同长度、不同数目的DNA片段。经电泳，溴乙锭染色，紫外照射成像后借助HLA分型程序或手工查表即可确定HLA基因型别 ......