蛋白酶K对盐析法提取全血DNA的影响
凝胶电泳,琼脂糖,1材料与方法,2结果,3讨论
贾二娟,朱伟锋,余乐涵(1、许昌市中心医院检验科,河南 许昌 461000;2、南昌大学医学院生物化学与分子生物学教研室,江西 南昌 330006)
盐析法是目前血液基因组DNA常用的提取方法之一,具有简便、快速、得到DNA的质量高的特点[1]。但有的研究中使用了蛋白酶K[2,3],有的研究中未使用蛋白酶K[1,4],均得到了高质量的DNA。为了了解蛋白酶K在盐析法提取全血DNA中的作用,我们以兔血为例进行了研究。
1 材料与方法
1.1 材料 10份4℃保存1个月的5%EDTA抗凝血样(EDTA量约占全血量的2/5)由南昌大学医学实验教学部生物化学与分子生物学实验室提供。兔血混匀后分蛋白酶K、非蛋白酶K两组进行实验,每组10份血样,每份血样200μl。所用试剂包括:Ⅰ液(10mmol/L Tris-HCl,10mmol/L KCl,10mmol/L Mg-Cl2,2mmol/L EDTA,25ml/L Trito X-100,pH 8.0),Ⅱ液 (10mmol/L Tris-HCl,10mmol/L KCl,10mmol/L MgCl2 ......
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