黄建国 ，吴立文 ，骆志辉 ，黄碧梅 ，刘菊花 ，刘彩珍

    (1、广东省龙川县妇幼保健院检验科；2、儿科；3、广东省龙川县人民医院儿科，广东 龙川 517300)

    手足口病(Hand-foot-mouth disease,HFMD)是由多种肠道病毒引起的常见传染病，以婴幼儿发病为主。大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。引起手足口病的病原体主要为肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)，其中EV71不仅引起HFMD，而且可引起脑膜炎、脑炎、急性迟缓性瘫痪等严重中枢神经系统并发症[1]。从1996年来，在东南亚、中国台湾、香港等地不断有HFMD暴发流行[2-3]。2008年在我国安徽和河南部分县市发生EV71感染引起的HFMD流行，并造成患儿死亡。近年，地处广东东北部山区的龙川县也出现HFMD散发病例，以每年4～6月间为发病高峰。我们收集了部分在我院和龙川县人民医院住院和门诊就诊的临床疑似手足口病的患儿标本，应用分子生物学方法对这些标本进行了肠道病毒基因检测，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 临床病例 所有病例均来自我院和龙川县人民医院2009至2010年住院和门诊病人，按照卫生部《手足口病预防控制指南(2008年版)》标准[4]，共收集临床诊断手足口病病例56例，其中男32例，女25例，年龄5月～12岁。

    1.2 标本的采集 用无菌方法采集急性期病人的粪便1～2g，置于灭菌的带盖玻璃瓶中，同时用干棉签准确地擦拭患儿的鼻咽部后，立即浸泡于含2～3ml Hank＇s液的灭菌试管,以上标本均立即-70℃冻存。

    1.3 实验试剂 10×PCR缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、随机引物、RNAsin酶和AMV逆转录酶为Promega公司产品，病毒核酸提取试剂为美国GIBCOL公司的TRIZOL-LSReagent RNA提取试剂盒。

    1.4 引物序列[5]引物由南方医科大学附属深圳宝安医院儿科张寿斌主任提供 ......