结核病实验室诊断技术进展
涂片,1结核病病原菌检测技术,2免疫学检测技术,3分子生物学检测技术
杨淑华 综述,张月香 审校(天津市中心妇产科医院检验科,天津300100)
结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的结核病是常见的人类传染病之一。约三分之一的世界人口曾经感染MTB,亚洲地区感染者占全世界的三分之二。据WHO估计,2007年全球约有927万新发结核患者,175万人死于结核病,中国是全球22个结核病高发国之一,发病人数 130万,居世界第2位,仅次于印度[1,2]。结核病的实验室诊断是发现传染源的主要途径和手段,是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据,长期以来,结核病的实验室诊断主要依赖细菌学涂片和培养检查。由于方法所限,严重影响了结核病的及时诊断,因此建立检测快速、灵敏度高、特异性强的诊断方法,对于结核病防治工作具有重要意义[3]。现将近年来结核病实验室检测技术的进展综述如下。
1 结核病病原菌检测技术
1.1 抗酸杆菌涂片镜检
1.1.1 萋-尼氏抗酸染色涂片 萋-尼抗酸染色涂片镜检是经典的结核分枝杆菌检测方法,目前很多实验室仍然依靠此方法进行结核检测,但其灵敏度较低,仅20%~30%,而且此方法繁琐,假阳性和假阴性较高。张立群对比了4种不同结核分枝杆菌检测方法,显示萋-尼抗酸染色涂片的阳性率为11.6%,灵敏度仅为26.3%[4]。
1.1.2 荧光染色法 以金胺-罗丹明为代表的荧光染色法提高了镜检的灵敏度,并使读片时间大大缩短,假阳性和假阴性也明显降低[5]。但荧光显微镜昂贵的价格,限制了其在基层的应用。
1.1.3 LED显微镜 将显微镜与发光二极管相结合研发的LED显微镜,具有低价格,长寿命,强可靠性等优点,诊断性能优于标准荧光显微镜。多项研究显示:LED检查的敏感性比传统镜检方法高约10%[6]。同时具备荧光染色的优点,且花费低、可实施性强,可更广泛地常规使用。
1.2 分枝杆菌培养技术
1.2.1 传统结核菌培养 结核菌培养仍是目前诊断MTB的金标准,尤其是药敏试验结果在指导临床用药及耐药性检测等方面具有重要作用[7],是鉴定是否为活菌的可靠方法,但传统的罗氏培养需要4~6周才能检测到结核菌的生长,而且阳性率也只有30%~40%;特异性差,各种分枝杆菌均可生长,要确定是否为结核菌,需结合分枝杆菌菌种鉴定和药物敏感性试验。
1.2.2 结核菌快速检测系统 BD公司推出的BACTEC-MGIT 960全自动分枝杆菌培养/鉴定/药敏系统,操作简便,阳性标本检出时间平均为9d;鉴定、药敏试验时间平均为4d;阳性标本检出率比传统培养方法提高10.77% ......
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