谭立明

    (南昌大学第二附属医院检验科,江西 南昌330006)

    酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是一种特殊的试剂分析方法，在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术，其试剂易于保存、结果判断较为客观，是目前实验室检测抗原抗体最经济、最普遍的试验诊断方法。其原理是将抗原(抗体)结合到固相载体表面，再将待测抗体(抗原)、酶标抗原(抗体)与固相抗原(抗体)结合形成免疫复合物，经洗涤使免疫复合物与待测抗体(抗原)呈比例，加入酶反应底物使其与固相上的酶反应变色，根据颜色做定性或定量分析，得出检测结果[1-3]。ELISA法步骤包括标本的采集、保存、加样、温育、洗板、显色、比色以及结果判断[4]，临床采集待检样本过程中常出现溶血、黄疸、脂浊，类风湿因子、高浓度非特异性免疫球蛋白、药物及血液抗凝剂等亦对结果产生一定影响[5]。虽然操作简单，但还是需要注意一些因素的影响[6-8]，试剂的选择、正确的操作、优良的仪器都与检测结果密切相关。本文根据样本的影响因素及操作流程中可能出现的相关问题展开笔述，对ELISA法检测的影响因素及相应对策作一综述，希望提高ELISA法检测的准确性。

    1 样本的影响因素

    临床采取空腹抽取静脉血清作为ELISA检测标本，标本采集过程中很多因素可能导致检测结果不准确，如溶血、脂浊、类风湿因子、甲胎蛋白、高浓度非特异性免疫球蛋白、药物、血液抗凝剂及细菌污染等。

    1.1 溶血 溶血时红细胞破裂释放出具有过氧化物酶活性的物质干扰试验结果出现假阳性，孙辉等[9-11]通过实验报道样品溶血血红蛋白浓度不大于4.95g/L，对双抗原夹心法、间接法、竞争法、捕获法检测结果均无影响。徐传国[12]认为溶血易导致弱阳性标本漏检，黎学东等[13，14]认为虽然溶血会对HB-sAg检测造成假阳性影响，但是小于8g/L时可以检测；王红等[15，16]使用不同的干扰物浓度及分析方法得出结论，随着溶血程度的增高HBsAg检测OD值有轻微增高趋势；但是溶血检测抗-HIV无影响[17]。

    临床工作中无法采集到无干扰物血清或因操作因素导致标本出现溶血时，评估标本干扰物含量及标本处理情况，在有效范围内进行ELISA检测，对于溶血标本可先测定血浆Hb含量，不大于5g/L时可用于HBsAg的检测，超过此范围的阳性标本最好做复检，避免假阳性结果发生[18]。目前也有通过增设试验孔的方法来处理轻度甚至重度溶血标本的检测，使溶血造成的假阳性结果得到纠正 ......