吴浩，兰兰

    (武宁县人民医院检验科，江西 武宁332300)

    肝硬化并发感染在临床上十分常见，而真菌感染的发病率呈上升趋势。由于肝硬化腹水患者库普弗细胞(Kupffer cell)数量明显减少，导致其不能发挥吞噬过滤作用[1]。同时血浆补体和调理素水平降低，低白蛋白血症，中性粒细胞Na+-K+-ATP酶活性降低，使中性粒细胞防御感染能力削弱[2]。另外，由于肝硬化时肠道菌群结构平衡被打破，肠道真菌数量和种类都可能发生改变，患者免疫防御系统遭破坏，念珠菌等肠道定植真菌很可能成为人体黏膜和侵袭性真菌感染的条件致病菌[3]。

    目前国内外更多关注肝硬化患者腹腔的细菌感染，而研究真菌感染方面较少。本文以分子生物学为研究方法，根据真菌18S rRNA基因兼有保守性和变异性的特点，在保守区设计一对通用引物，通过PCR方法结合克隆测序法，检测肝硬化患者腹水中真菌感染情况。

    1 材料与方法

    1.1 病例选择 收集2010年3月至2011年3月我院158例肝硬化患者的腹水标本，每份腹水标本收集1次，男127例，女31例，年龄21~79岁，平均年龄(54.7±13.0)岁。肝硬化诊断符合2000年9月西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》中的诊断标准[4]。取受试者腹水，接种在沙保氏培养基上30℃培养3~7d，通过形态学检测结合法国生物梅里埃公司的Vitek YBC卡鉴定菌种。同时收集腹水分装于2 ml进口高压灭菌的 Eppendorf管中。所有标本均在1 h内处理完毕，并置于-80℃冰箱中待抽提 DNA[5]。

    1.2 对照菌株 阳性对照真菌：白色念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、新型隐球菌、曲霉菌。阴性对照菌细菌：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌。 以上菌株由检验科微生物室提供 ......