陈薇婴综述，关禹博审校

    (天津市眼科医院天津市眼科学与视觉科学重点实验室天津医科大学眼科临床学院检验科，天津300020)

    铜绿假单胞菌生物膜形成与眼部感染

    陈薇婴综述，关禹博审校

    (天津市眼科医院天津市眼科学与视觉科学重点实验室天津医科大学眼科临床学院检验科，天津300020)

    铜绿假单胞菌；生物膜；眼病

    铜绿假单胞菌(PA)广泛分布于自然界、医院环境、医疗器械以及人类正常皮肤、肠道、呼吸道等，是极为常见的条件致病菌，是院内感染的主要致病菌之一。铜绿假单胞菌引起的一些迁延不愈的慢性感染性疾病与其在感染部位形成生物膜(biofilm,BF)有关。同样，一些眼部感染性疾病或一些生物材料植入而导致的并发症，也常常是因为感染了产生物膜的菌株，尤以产生物膜的铜绿假单胞菌为主，由于生物膜的产生使得该菌耐药性增强，从而导致治疗困难。

    1 铜绿假单胞菌生物膜的形成

    1.1 铜绿假单胞菌生物膜的形成过程细菌在自然界一般以浮游或聚集状态存在，但99%是以聚集状态即形成生物膜的方式侵入人体[1]，易在生物医学材料或机体黏膜上聚集，以抵御吞噬细胞的吞噬和机体的免疫系统。

    铜绿假单胞菌侵入人体后，首先借助于鞭毛到达可黏附物表面并在其形成单层菌落，最初为可逆性黏附，后发展为不可逆黏附，随后在菌毛的作用下在黏附表面形成微菌落并最终形成成熟的生物膜[2]。

    1.2 铜绿假单胞菌生物膜的分子结构铜绿假单胞菌侵入人体后即突变为黏液株，其自身分泌大量的胞外多糖并包裹细菌形成生物膜的主要成分，藻酸盐是胞外多糖的主要成分[3，4]，生物膜还含有细菌分泌的各种主要的生物大分子如蛋白质、多糖、DNA、RNA、肽聚糖、脂和磷脂等物质。

    1.3 铜绿假单胞菌生物膜形成的观察

    1.3.1 染色法银染法一般是采用硅胶、聚氯乙烯或玻片等作为生物膜载体[5]，用5%AgNO3溶液染色后在普通光学显微镜下观察生物膜的形成。通过银染法发现[6]对照组镜检仅见散在的黑点或黑斑，细菌培养7d后黑染部分形成棉絮样的膜状物，说明有生物膜形成。

    使用刚果红-阿利新蓝(AB)染液联合胞外多糖染色，细菌细胞呈淡红色，胞外多糖呈深紫红色，用扫描电镜观察发现形成生物膜的细菌紧密堆积且边缘不清晰，胞外多糖聚集成团围绕在菌体周围[7]。

    染色法的优点是试验条件要求不高，试剂价格低廉，敏感性较好，但操作较繁琐且实验周期较长，有时可能影响生物膜的完整结构 ......