樊玉祥，何文婷 ，李沫函 ，王雪娇 ，张洪亮

    (1、新疆医科大学附属中医医院肿瘤二科，新疆 乌鲁木齐 830000；2、新疆医科大学附属中医医院，新疆 乌鲁木齐 830000)

    胃癌目前是亚洲地区第二大致死性疾病，在我国发病率居消化道肿瘤第一位[1]，积极的外科治疗仍是治疗早期胃癌的主要手段[2]。但是手术治疗或其联合放化疗治疗进展期胃癌仍存在巨大的困难[3，4]，如手术风险、痛苦，放化疗的毒副反应等，患者往往难以耐受。近年来中药在抗肿瘤方面作用机制的研究越来越受到多方学者的重视[5]。早在上世纪70年代，我国学者就报道了由新疆道地药材骆驼蓬中提取的去氢骆驼蓬碱及骆驼蓬碱具有抗消化道肿瘤的作用，同时有多种制剂应用于临床，取得了一定的疗效。骆驼蓬中主要成分为β-咔啉类生物碱[6，7]，但目前抗肿瘤机制尚不清楚。本次实验观察不同浓度的β-咔啉类生物碱诱导人胃癌SGC-7901细胞的凋亡，为研究β-咔啉类生物碱诱导该细胞凋亡的机制奠定了基础，同时选择一种合适的检查细胞凋亡的方法对观察效果起着决定性的作用。故本次实验采用MTT法、Hoechest33258细胞核染色法、流式细胞检测观察细胞凋亡。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料 人胃癌SGC-7901细胞 (中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)，β-咔啉类生物碱 (北京中医药大学刘永刚教授惠赠)MTT、DMSO、Hoechest33258(Sigma 公 司 )，Annexin VFITC细胞凋亡检测试剂盒(贝博)，酶标仪(Thermo，1500)，流式细胞计数仪 (MILLIPORE guava easy-Cyte 8HT)，荧光扫描仪(BIO-RAD Gel DocTMXR+)，荧光显微镜 (莱卡，DMI6000B)，二氧化碳培养箱(Thermo)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 选择生长状态良好的细胞分别接种于96孔板、细胞培养瓶中，置于37℃、5%二氧化碳浓度细胞培养箱中孵育。待细胞贴壁后更换培养液，按不同浓度给药，随机分为5组(A组40μg/ml，B 组 20 μg/ml，C 组 10 μg/ml，D 组 5 μg/ml，E空白对照组，所示浓度为终浓度)，药物作用24h、48h后收集细胞 ......