吴建英，宋建新，曹金萍，涂智杰，余慧宏，胡芹，魏建萍，潘剑

    (江西省景德镇市疾病预防控制中心，江西 景德镇333000)

    食品中污染的病原菌是引起食源性疾病的主要因素之一。金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aures)、产单核李斯特菌(Listeriamonocytogens)和沙门菌(Salmonella spp)是肉与肉制品、乳与乳制品、水产品、冷冻饮料与饮料、调味品[1]等都需要检测的3种食源性致病菌。目前对这些食源性致病菌的检测，主要还是按照传统的细菌学培养方法，一般需3~7d，操作繁琐，耗时费力[1]。因此急需建立快速有效的检测方法。

    本研究通过使用LB培养液进行8h振荡培养增菌与优化多重PCR反应体系，建立一种低廉、高效、简便的多重PCR检测方法。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1 .1菌株 实验所用菌株共7株，分别为金黄色葡萄球菌 (ATCC29213)、产单核李斯特菌(CMCC54004)、沙门菌(H9812)、志贺菌(ATCC10412)、蜡样芽孢杆菌 (CMCC(B)63303)、大肠埃希菌O157(ATCC43888)、阪崎肠杆菌(ATCC29544)。所有菌株均为本实验室保藏菌株。

    1.1 .2培养基 LB培养液组成成份胰蛋白胨10g/L、 酵母提取物 5g/L、NaCl 10g/L， 使用 1mol/L NaOH调pH至7.0。

    1.1 .3 试剂及仪器 Taq DNA聚合酶、dNTP、MgCl2、10×PCR buffer、PCR 回 收 试 剂 盒 、DL2000 DNA Marker购于北京天根生化科技有限公司；琼脂糖为西班牙Biowest公司产品；溴化乙锭(EB)为美国Sigma公司产品；引物由上海生工合成。PTC-200 PCR仪为美国MJ公司产品；DYY-6C电泳仪为北京六一仪器厂生产；GelDoc 2000凝胶成像系统为美国Bio-Rad公司生产；LEGEND MICRO 21Centrifuge高速离心机为美国Thermo Scientific公司生产；FLY-211B恒温摇床。

    1.2 方法

    1.21 引物设计 根据金黄色葡萄球菌编码耐热核酸酶基因nuc[2]、产单核李斯特菌特异溶血素基因hlyA[3]、沙门菌编码侵染上皮细胞表面蛋白的invA基因[4]设计了3对引物)(表1) ......