李健雄，熊英，施勇，龚甜，周珺，徐刚

    (江西省疾病预防控制中心，江西南昌330029)

    ·论著·

    江西省2009年至2012年甲型H3N2流感病毒耐药性分析

    李健雄，熊英，施勇，龚甜，周珺，徐刚

    (江西省疾病预防控制中心，江西南昌330029)

    目的分析江西省2009-2012年甲型H3N2流感病毒M2以及NA基因的特点，掌握其耐药情况，为临床治疗和疾病控制提供参考。方法从江西省流感监测网中随机选择19株甲型H3N2流感病毒，经核酸提取和one-step RT-PCR扩增M以及NA基因片段，双向序列测定，采用DNAStar5.0和Mage4.0序列分析软件分析M2以及NA基因特征以及耐药性位点。结果19株毒株M2基因31位氨基酸均由丝氨酸(S)突变为天冬酰胺(N)；所有毒株NA蛋白催化活性位点和辅助位点均未发生氨基酸替换。结论19株毒株均对金刚烷胺类药物耐药，对流感病毒神经氨酸酶抑制剂药物均敏感，但仍应加强对流感病毒的耐药性监测。

    甲型H3N2流感；M2；NA；耐药性

    甲型H3N2流感病毒是引起人类流感的甲型流感病毒的一个重要亚型，是上世纪第三次世界流感大流行的病原，在人群中流行近一个世纪，每次流感流行都给社会带来严重的经济损失,造成不同程度的人群超额死亡率[1,2]。目前，流感病毒药物主要有针对M2蛋白的烷胺类药物和神经氨酸酶抑制剂类药物[3]，但此类药的耐药株不断出现，并呈增加趋势。为了解我省甲型H3N2流感病毒耐药基因特征，本研究对江西省2009年至2012年分离的季节性H3N2流感病毒的NA基因和M2基因进行测序，分析我省甲型H3N2流感病毒的耐药性特点。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源采集监测医院流感样病例咽拭子标本或流感疫情病例咽拭子标本。

    1.2 病毒分离采用狗肾传代细胞(MDCK)进行病毒分离，根据细胞病变和微量血凝实验方法(HA)来判断是否有病毒存在。将HA滴度≥1∶8的标本采用血凝抑制方法(HI)进行流感病毒型别鉴定(MDCK和标准血清均由国家流感中心提供)。所有毒株均经国家流感中心复核鉴定。

    1.3 病毒选择选择19株来自不同时间、不同流感监测医院病例的咽拭子标本中分离到的甲型H3N2流感病毒，对其NA基因和M基因进行基因扩增和测序。

    1.4 病毒RNA提取采用德国Qiagen公司的QIAamp Viral RNA Mini Kit试剂对含流感病毒的MDCK细胞培养液进行病毒RNA的提取 ......