刘淑媛，万腊根，闻芳，李欣，张长林

    (南昌大学第一附属医院检验科，江西 南昌330006)

    阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)是一种或几种造血干细胞发生PIG-A基因突变，导致糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidy inositol,GPI)锚蛋白合成障碍，引发细胞膜锚连蛋白缺失，补体活化异常所致的溶血性疾病[1]。目前通过流式细胞仪检测细胞膜表面CD55、CD59的缺失已成为诊断PNH的首选实验方法；但CD55、CD59等补体调节蛋白的表达还会受到其它因素的影响，如骨髓增生异常综合征(MDS)、细胞发育不全等均有可能导致膜蛋白的缺失[2]，因此仍有一定的局限性。随后，Brodsky等[3]发现PNH细胞对气单胞菌溶素抵抗，利用这一特性可区分GPI+和GPI-细胞。经过改进，目前已经可以用荧光标记嗜水气单胞菌溶素前体的变异体(fluorescent aerolysin,FLAER)，使之成为诊断PNH更特异的方法。我们利用流式细胞仪对临床患者的血标本进行FLAER及CD55、CD59检测，对其结果进行比较，以探讨FLAER检测在PNH诊断中的意义。

    1 材料与方法

    1.1 研究对象 所有患者均为南昌大学第一附属医院2013年至2014年的门诊或住院患者。其中PNH患者10例，经补体相关溶血试验及流式细胞术检测确诊；非PNH贫血患者37例，均为缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血等营养不良性贫血患者。

    1.2 仪器与试剂 美国Beckman-Coulter公司FC500 型流式细胞仪 (FCM)，CD14-ECD、CD24-PC5、CD55-PE和CD59-FITC荧光标记单克隆抗体、FLAER试剂及红细胞裂解液均购自美国Beckman公司。

    1.3 方法

    1.3 .1 外周血红细胞CD55、CD59检测 EDTA抗凝外周血标本以生理盐水稀释，调整红细胞数为109/L；取30μl红细胞悬液于流式专用试管中，分别加入3μlFITC标记的鼠抗人CD59和3μlPE标记的鼠抗人CD55抗体 ......