蔡壬辛 ，洪旭灿 ，张轩 ，李沫 ，秦笙 ，许振杰 ，曾建明

    (1、广东省中医院检验科，广东 广州 510006；2、佛山市第二人民医院检验科，广州 佛山528000)

    CD44是广泛分布于多种细胞表面的糖蛋白分子，属黏附分子的成员，具有多种重要的生物功能，它与细胞黏附、淋巴细胞活化和归巢、肿瘤生长和转移密切相关[1,2]；CD44分子呈广泛多态性，多态性主要由核心肽的不同及翻译后的糖基化修饰引起[3]。目前对CD44分子的研究主要集中在实体瘤，相继发现CD44v6亚型的过度表达与多种人体恶性肿瘤的发生、发展、侵袭和转移密切相关，被认为是肿瘤转移促进因子[4-7]。

    化疗后复发是白血病治疗的难点，近十年提出残留的白血病干细胞(leukemia stem cells,LSCs)是疾病复发的根源。有研究提示拮抗LSCs黏附、归巢(homing)途径可能有助于杀灭LSCs[8]。有研究发现CD44单克隆抗体A3D8通过抑制ERK1/2上调Bim诱导HL-60细胞早期凋亡[9]。CD44通过p27Kip1途径抑制AML细胞增殖[10]。伊马替尼是治疗慢性粒细胞白血病(CML)的一线药物，它能够降低JURL-MK1细胞CD44等分子表达，并引起细胞凋亡[11]；现发现伊马替尼耐药细胞中CD44亦表达增高[12]，阻断CD44有益于CML患者自体移植[13,14]。另外，CD44在AML和CML的LSCs细胞龛中发挥重要作用[15]。此外，淋巴瘤CD44高表达患者发生治疗不缓解或复发，甚至死亡率更高[16]；小鼠动物实验也发现BCR-ABL1转染的CD44缺陷干细胞不能在受体小鼠骨髓归巢[13]，这提示通过干预CD44途径实现拮抗残留的LSCs，有望成为白血病治疗新的切入点。

    本实验旨在通过PCR检测临床血液肿瘤患者和细胞株CD44分子，并通过基因重组技术构建CD44胞外区(hCD44om)多肽原核表达载体，在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达，为下一步研究CD44骨髓靶向功能奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1 .1 主要试剂 X-gal、IPTG、 氨苄西林钠(Amp)、低分子质量蛋白标准、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺，购自大连宝生物工程有限公司；酵母提取物、胰蛋白胨、低熔点琼脂糖，购自北京原平皓生物工程公司；限制性内切酶EcoR I、HindⅢ，连接酶，Ex TaqDNA聚合酶为 TakaRa公司产品；Trizol、DNA Marker、质粒抽提和胶回收试剂盒为东盛公司产品 ......