黄淑英，鲁勇，刘静

    (1、南昌大学第二附属医院检验科，南昌330006；2、新建县人民医院，江西 新建 330100)

    急性髓系白血病 (acute myeloid leukemia,AML)是一种以骨髓中异常的原始细胞和幼稚细胞大量增殖并抑制正常造血为特征的高度异质性的恶性血液病[1]，其死亡率在全国各年龄段恶性肿瘤死亡率中名列前茅，居儿童和35岁以下成人恶性肿瘤死亡率的榜首[2]。临床上，AML的早期正确诊断对疾病的治疗、预后、疗效观察均有十分重要的意义，目前除了国际上统一的急性白血病传统的FAB形态学分型和MICM(Morphology,lmmunology,Cytogenetics,Molecular biology)分型外，寻找新的无创诊断与分型的生物学标志物也是当今研究者所关注的焦点[3]。

    microRNA是新近发现的一类在转录后调控基因表达的小分子RNA，研究表明它与急性白血病的发生发展密切相关，且在不同的类型中呈特征性表达，因此在白血病的诊断治疗方面有极大的潜力[4,5]。最近研究发现，microRNA-335在不同肿瘤中分别发挥着抑癌基因和促癌基因的作用，参与多条癌性信号通路的调节[6]，在AML患者骨髓原始细胞中高表达[7]。但其在AML患者外周血中的表达情况及其临床意义尚无相关研究提及，本研究拟通过RT-PCR对AML患者循环miRNA-335的表达量进行测定并探讨其在AML中的临床意义。

    1 资料与方法

    1.1 基本资料 本研究收集2010年1月-2012年12月南昌大学第二附属医院初诊未治疗AML患者。所有病例均按照张之南、沈悌主编《血液病诊断及疗效标准》第3版急性髓系白血病的诊断标准，联合基因、免疫表型、生物学、临床特点对疾病进行诊断。本研究经医院医学伦理学委员会批准，患者知情同意。所有病例均在入院未采取任何治疗时采集EDTA抗凝外周血2ml，离心分离血浆-80℃保存备用。

    1.2 仪器与试剂 逆转录试剂盒、qRT-PCR试剂盒(TaKaRa公司)，ABI7500荧光定量PCR扩增仪(美国 Applied Biosystems公司)，PCR扩增仪 (德国Biometra 公司)，Trizol(美国 Invitrogen 公司)，紫外分光光度计(日本岛津公司)。

    1.3 总RNA的抽提 取1ml TRIZOL标本，加入200μl氯仿， 离心 12000g，15min； 取无色水相层500μl至新的EP管，加500μl异丙醇，冰上静置30min 后离心 12000g ......