陈洁，王健

    (江西中医药大学附属医院，1、病理科；2、检验科，江西 南昌330006)

    CD137/CD137L是除CD28/B7之外的另一对重要的共刺激分子，在免疫细胞之间进行双向信号传导，在免疫应答、抗肿瘤免疫和自身免疫性疾病中起重要作用[1]。CD137L属于肿瘤坏死因子超家族9，是肿瘤坏死因子家族的一员，它主要表达在抗原呈递细胞(APC)，成熟的树突状细胞，也可表达于活化的B细胞和巨噬细胞等[2]。CD137信号传导途径既能提供刺激信号激活T细胞，使T细胞活化增殖分泌细胞因子，在诱导这种刺激信号的同时它也介导反向刺激信号，诱导APC活化增殖和分泌细胞因子，这种双向信号传导更加迅速和精确地调节机体的生物反应[3]。研究发现CD137L除了高表达于淋巴或骨髓来源的肿瘤细胞表面，还表达于多种实体瘤细胞株表面，如Colo205、PC3、SKBR3等肿瘤细胞株[4]。本研究采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色方法检测食管癌组织及癌旁组织中CD137L的表达，探讨CD137L在食管癌组织及癌旁组织中的表达差异及CD137L的表达水平与食管癌的临床病理特征、预后等临床参数之间的关系，揭示CD137L在食管癌发生进展中的作用，为寻找食管癌新的分子标志物及治疗靶点奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源 收集华中科技大学同济医院和江西中医药大学附属医院2010年1月至2013年12月期间经手术切除病理诊断为食管鳞状细胞癌的石蜡标本31例，购买食管鳞状细胞癌组织芯片30例，癌旁组织30例。其中男性36例，女性25例，年龄25~78岁，中位年龄59岁。这些标本用于免疫组化实验。收集华中科技大学同济医院2014年5月至12月手术切除的食管癌组织18例，正常食管组织3例，经福尔马林浸泡时间均小于5h，采集未直接接触福尔马林的黄豆大小的癌组织、癌旁组织及正常食管组织，置-80℃冰箱保存。这些标本用于RT-PCR实验。(癌旁组织是指距离癌组织边缘1㎝以上没有癌组织的正常食管组织)

    1.2 试剂和方法 采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)检测CD137L在食管癌中的表达。61例食管癌组织标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm连续切片。兔抗人CD137L单克隆抗体和SP试剂盒均购自武汉博士德公司，具体实验步骤按试剂盒操作说明书进行。每次染色均用PBS替代一抗作为阴性对照。组织芯片购自于上海芯超公司。

    RT-PCR所用的试剂盒主要有固定组织RNA提取试剂盒、HiFiScript快速去基因组cDNA第一链合成试剂盒、UltraSYBR Mixture等均购自康为世纪生物技术有限公司 ......