简正伟 ，石淙 ，闻芳 ，万腊根 ，张长林

    (1、南昌大学第四附属医院检验科，江西 南昌330003；2、南昌大学第一附属医院检验科，江西 南昌330006)

    急性髓细胞白血病 (acute myeloid leukemia,AML)是多能干细胞发生突变所形成的一类具有细胞和分子遗传学特征的高度异质性疾病。随着分子生物学技术不断的应用于临床，越来越多的基因突变检测对临床的治疗起着重要提示作用。其中NPM1和FLT3-ITD基因是突变率最多见的两类，2010年美国血液学会 (American Society of hematology)会议已明确[1]，NPM1基因突变是AML,尤其是正常核型AML预后良好的指标,而具有FLT3-ITD基因突变患者预后较差。本研究分析187例初发急性髓细胞白血病患者NPM1和FLT3-ITD基因突变情况，并分析其临床特征。

    1 材料与方法

    1.1 临床病例 收集2011年6月至2013年2月南昌大学第一附属医院急性髓细胞白血病初发病例187例，所有患者都经细胞形态学和流式细胞术免疫学分型，并参照《血液病诊断及疗效标准》[2]确诊为AML的病例。其中M1占9例，M2占72例，M3占50例，M4占20例，M5占24例，M6占4例。男女比例100:87，中位年龄41(13～79)岁。

    1.2 染色体分析 取肝素抗凝的骨髓液2ml，换算成有核细胞约(1～2)×106/ml，然后分别用直接法和短期培养法制备染色体，采用G显带技术进行核型分析。染色体核型描述参照《人类细胞遗传学国际命名体制(ISCN 2005)》。

    1.3 NPM1和FLT3-ITD突变检测 取200μlEDTA抗凝骨髓，参照飞捷生物科技公司的微量基因组DNA极速抽提试剂盒提取基因组DNA，获得的基因组DNA通过紫外分光光度计进行定量，取50～100ng/μl基因组DNA进行基因突变检测。NPM1突变检测方法见参考文献[3]。以特异性引物扩展FLT3-ITD基因突变区,上游引物为5’gcaatttaggtatgaaagccagc-3’， 下游引物为 5’ctttcagattttgacggcaacc-3’,扩展产物经琼脂糖凝胶电泳分析，野生型FLT3扩展产物为329bp，存在ITD突变会在野生型条带上游出现特异性条带。

    1.4 统计学分析 应用SPSS17.0统计学软件进行分析，以中位数进行统计，P<0.05有统计学意义。

    2 结果

    2.1 NPM1和FLT-ITD突变检测 采用等位基因特异性PCR(Allele-specific PCR,AS-PCR)方法检测NPM1基因突变 ......