王建伟，孙嘉峰，黄毅

    (1、福建省立医院南院福建省立金山医院检验科，福建 福州350008；2、福建省立医院检验科，福建 福州350001)

    乙型肝炎病毒DNA(hepatitis B virus Deoxyribonucleic acid，HBV DNA)是反映HBV复制活跃程度及传染性的最直接指标，也是观察抗病毒药物疗效、预后和指导抗病毒药物应用的重要指标之一。HBVDNA定量检测从根本上突破了免疫学方法等间接方法的局限性，通过直接检测病毒核酸水平，可真实反应患者体内病毒水平[1-3]。目前提取HBVDNA主要采用煮沸法，该法不能有效去除干扰物质如血红蛋白，提取的血浆HBV DNA含量较低，接近临界值标本的提取结果不稳定，在临床检测中容易产生假阴性[4]。本研究应用西安天隆NP968自动核酸提取仪(磁珠法)提取HBVDNA，相比传统的煮沸法，具有快速、简便、减少人工误差等特点。根据ISO15189医学实验室认可标准[5]，必须对其检测系统进行性能评价，本文通过分析其精密度、线性、回收率、最低检出限，并将检测结果与传统煮沸法进行对比，分析其相关性，从而评价该法对HBVDNA检测的性能。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源 来自2014年10月13日至10月17日我院PCR实验室接收的79例门诊患者血浆标本及我院免疫室接收的20份我院国内体检健康人血清标本。

    1.2 仪器与试剂

    1.2.1 试剂 HBVDNA荧光定量PCR检测试剂盒与HBVDNA标准品(广州达安公司)；核酸提取(磁珠法)试剂盒(西安天隆公司)。

    1.2.2 仪器 NP968核酸提取仪(NP968，西安天隆公司)；ABI7300实时荧光PCR仪 (ABI7300,美国ABI公司)。

    1.3 检测方法

    1.3.1 HBVDNA提取与检测

    1.3.1.1 煮沸法 按照达安公司HBVDNA荧光定量PCR检测试剂盒说明书取待测血浆样本、HBVDNA荧光定量PCR检测试剂盒内阳性对照品、阴性对照品、标准品和自制高值、低值质控品各30μl，分别加入70μl核酸提取液，充分振荡混匀后 ，100℃ 恒 温 处 理 10±1min，12000r/min 离 心5min，取 20μl上清液加入反应管 ......