钟展华，邹晓东，万小春，丁 渭，严凤好

    (1、惠州市中心血站，广东惠州516000；2、中山大学达安基因股份有限公司，广东广州510665)

    一种低成本血液HIV病毒核酸筛查系统的开发和应用

    钟展华1，邹晓东1，万小春1，丁 渭2，严凤好1

    (1、惠州市中心血站，广东惠州516000；2、中山大学达安基因股份有限公司，广东广州510665)

    目的开发一种低成本，有效和方便快捷的血源筛查核酸检测系统。方法利用临床上使用的HIV-1核酸定量检测试剂，用酶免实验用的加样器对血液标本进行混样和核酸提取。结果使用常规方法和加样器改进方法的检测有效性没有差异，经过加样器改进的方法检测速度快，比常规手工方法劳动强度大大降低。结论低成本血液HIV病毒核酸筛查系统，成本低，效率高，可以有效提高血液的安全性。

    低成本核酸检测；血液安全；PCR；HIV

    核酸扩增技术(NAT)直接检测病毒核酸，因其可缩短病毒检测的窗口期而被应用于献血者筛查。西方发达国家1999年开始已经将NAT检测纳入献血者的常规筛查项目，输血感染传染病的危险性因而大大降低。我国近两年大力推进核酸检测，但核酸检测的成本很高，很多中小血站无法承受昂贵的检测费用。笔者所在血站与达安基因公司合作，将应用于临床的HIV PCR核酸定量试剂用于血液筛查，并利用现有的加样器对检测方法进行改进，提高了检测效率，降低了检测成本。现将有关内容报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 检测标本2013年12月至2015年7月我站无偿献血的留样常规标本，使用5ml带分离胶EDTAK2真空采血管留样，1500r/min离心5min后2～8℃冰箱保存。

    1.2 仪器7500荧光定量PCR仪(美国ABI公司)；瑞士哈米尔顿STAR自动加样仪及其配套一次性加样针(瑞士HAMILTON公司)；单通道连续移液器(法国Gilson公司)；恒温金属浴(江苏金坛)。

    1.3 试剂和耗材HIV核酸定量试剂盒(PCR-荧光探针法)(广州达安基因)、核酸提取试剂盒(离心柱法)、HIV-1 RNA标准物质(北京康彻斯坦生物，浓度为2000IU/ml，批号：201312001)、无水乙醇、经高压灭菌的一次性离心管和吸头、灭菌1.6ml深孔板等采购市售产品。

    1.4 标准的核酸提取方法吸取每人份20μl血浆进行11人份混样，将混样的标本分配到已加入50μl蛋白酶K的1.5ml离心管内，按照试剂说明书进行核酸提取：加病毒裂解液→震荡→离心→温育→加无水乙醇→震荡→离心→转移到离心柱→离心→加入抑制物去除剂→离心→换收集管→加入去离子液→离心→换收集管→加入去离子液→离心→换收集管→离心→换离心管→烘干→加洗脱液→静置→离心→分配反应液→加样→盖八连管盖子→离心→上机 ......