刘芬，李勇，彭菲菲，胡国文，熊加悦，娄远蕾，曾振国，邵强，钱克俭(、南昌大学第一附属医院重症医学科，江西南昌0006；、南昌大学第一附属医院肿瘤科，江西南昌0006；、南昌大学第二附属医院脑外科，江西南昌0006；、北京大学医学部护理学院0级6班，北京009；、南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所，江西南昌0006)

    iPSC-MSC来源的外泌体对LPS刺激肺泡巨噬细胞产生炎性因子的影响

    刘芬1，李勇2，彭菲菲1，胡国文3，熊加悦4，娄远蕾5，曾振国1，邵强1，钱克俭1

    (1、南昌大学第一附属医院重症医学科，江西南昌330006；2、南昌大学第一附属医院肿瘤科，江西南昌330006；3、南昌大学第二附属医院脑外科，江西南昌330006；4、北京大学医学部护理学院2015级6班，北京100191；5、南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所，江西南昌330006)

    摘要：目的探讨iPSC-MSC来源的外泌体(exosome，Exo)对LPS刺激的肺泡巨噬细胞释放炎性因子的作用。方法采用旋转超滤法提纯iPSC-MSC外泌体，以无外泌体培养基培养肺泡巨噬细胞NR8383，分别给予Exo(50μg/ml)、LPS(50ng/ml)、LPS(50ng/ml)+Exo(50μg/ml)培养24h，以不含Exo和LPS培养为对照组，利用酶联免疫标记法(ELISA)检测各组上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白浓度。结果提取物经透射电镜观察为圆形或半圆形囊泡，直径40~100nm，表达Exo标志物CD9和CD63；LPS组上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度(435.38±36.31pg/ml、319.76±39.14pg/ml和408.33±43.44pg/ml)与空白对照组(37.48±8.75pg/ml、33.51±7.88pg/ml和37.73±8.46pg/ml)和Exo组(38.71±9.14pg/ml、32.05±6.81pg/ml和42.84±6.54pg/ml)比较显著上调(P1 材料与方法

    1.1细胞、试剂和仪器肺泡巨噬细胞株NR8383购自上海中国科学院细胞库；iPSC-MSC细胞株由上海交通大学附属第六医院四肢显微外科实验室惠赠；胎牛血清：Gibco公司；Ham F-12K培养基和LPS(E.coli，O111：B4)均购自Sigma-Aldrich公司；BCA蛋白分析试剂盒：南京诺唯赞生物科技有限公司；兔抗大鼠CD9、CD63单克隆抗体：Abcam公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG：中杉金桥；SuperSignal West Femto化学发光底物：Thermo；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β、IL-6)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒均购自上海依科赛生物制品有限公司；Model8050旋转超滤仪、100000NWCO超滤膜和0.22μm过滤器均购自Millipore公司；H-7650透射电子显微镜：Hitachi公司；高分辨率可调电阻脉冲生物颗粒检测仪：Izon公司；化学发光成像分析仪：GE Healthcare公司 ......