吴伟全，李元歌，王思捷，杨腾，吴平(、广东医学院临床医学研究中心，广东湛江5400；、广东医学院附属医院放射科，广东湛江5400)

    基于激光共聚焦显微镜λ扫描检测蒿草切片荧光光谱的研究

    吴伟全1，李元歌2，王思捷1，杨腾1，吴平1

    (1、广东医学院临床医学研究中心，广东湛江524001；2、广东医学院附属医院放射科，广东湛江524001)

    摘要：目的研究激光扫描共聚焦显微镜λ扫描检测蒿草切片的荧光光谱，为基于共聚焦显微镜获得生物医学样本的荧光光谱提供理论和实验依据。方法运用普通荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜分别观察荧光染色的蒿草切片，实验分为三组：A组用普通荧光显微镜观察并拍照；B组用激光扫描共聚焦显微镜检测荧光光谱；C组用激光扫描共聚焦显微镜扫描荧光图像。结果荧光显微镜可以观察到蒿草切片的荧光图像，但不能准确获取其相应荧光激发和发射波长，而且会发生串色干扰现象。激光扫描共聚焦显微镜能对蒿草切片进行荧光光谱扫描，排除了干扰波长，获取其荧光激发和发射波长，得到高清晰度的荧光图像。结论与普通荧光显微镜比较，激光扫描共聚焦显微镜有能准确获取样本荧光光谱，得到高清晰度荧光图像的优点。

    关键词：激光共聚焦显微镜；蒿草切片；荧光；光谱分析

    随着生物医学的研究发展，获得生物医学样本的荧光光谱在生物医学研究中越来越重要[1]。荧光显微镜可以观察到其荧光图像，但不能准确获取其相应荧光激发和发射波长[2]。随着激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope，LSCM)的发展，其λ扫描功能可以扫描生物医学样本的荧光光谱，但目前相关的研究较少，有待深入研究[3]。因此本研究使用激光扫描共聚焦显微镜λ扫描功能检测生物医学样本的荧光光谱，获取其相应的荧光激发和发射波长，并准确获得其荧光图像，为基于激光扫描共聚焦显微镜获得生物医学样本的荧光光谱提供理论和实验依据。

    1 资料与方法

    1.1材料与仪器采用德国Leica公司广州分公司的多种混合荧光染料染色蒿草切片，蒿草切片制片共有18张，分为A、B、C三组，每组6张。A组用普通荧光显微镜观察并拍照；B组用激光扫描共聚焦显微镜λ扫描检测其的荧光光谱；C组用激光扫描共聚焦显微镜扫描其荧光图像。Leica T CSSP5 II激光扫描共聚焦显微镜(德国)；奥林巴斯IX70普通荧光显微镜(日本)。

    1.2普通荧光显微镜观察蒿草切片并拍照蒿草切片制片后置于奥林巴斯IX70荧光显微镜载物台上，分别以紫外光(360~380nm)、蓝光(460-490nm)、绿光(520-550nm)为激发光源激发样品 ......