毛欣茹，张诗蒙，尹小毛

    (1、南方医科大学南方医院，广东广州510515；2、深圳市蛇口人民医院，广东深圳518067；3、南方医科大学第五附属医院，广东广州510900)

    结核分枝杆菌mpt64基因突变研究

    毛欣茹1，张诗蒙2，尹小毛3

    (1、南方医科大学南方医院，广东广州510515；2、深圳市蛇口人民医院，广东深圳518067；3、南方医科大学第五附属医院，广东广州510900)

    摘要:目的分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)mpt64基因突变情况。方法提取MTB标准株H37Rv 和45株MTB临床株的DNA，扩增mpt64基因并进行序列分析。结果MTB标准株H37Rv和44株MTB临床株的mpt64基因无突变，1株MTB临床分离株的mpt64基因存在63个碱基的缺失突变。结论结核分枝杆菌mpt64基因突变频率低。

    关键词：结核分枝杆菌；mpt64基因；突变分析；非结核分枝杆菌

    结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)在生长早期会分泌一些特异蛋白，其中包括分泌量较大的MPT64蛋白[1，2]。近年来，该蛋白作为MTB的生长指示蛋白在分枝杆菌的鉴别中发挥了重要作用，目前临床实验室通过检测培养基中是否存在该靶蛋白就能轻松实现MTB的快速鉴定[3，4]。此外，MTB分泌的MPT64蛋白可刺激被感染者产生针对该蛋白的特异性抗体，实验人员通过检测患者血清中的抗MPT64抗体即可为临床结核病的诊断提供参考依据[5]。mpt64基因为MPT64蛋白的编码基因，该基因突变后表达的突变型蛋白与野生型蛋白在抗原特性上存在较大差异，从而可导致MTB的鉴定和抗MPT64抗体的检测出现假阴性结果。基于上述背景，本研究对MTB临床菌株的mpt64基因突变情况进行了初步分析，现报告如下。

    1 材料与方法

    1.1菌株MTB标准株H37Rv由深圳市慢性病防治中心惠赠，45株MTB临床株分离自结核病患者的痰液或支气管肺泡灌洗液，均通过生化反应和分子鉴定相结合的方法鉴定为MTB。

    1.2试剂DNA提取液购自德国QIAGEN公司，Capilia TB assay MPT64检测试剂盒购自杭州创新生物检控技术有限公司，Takara TaqTM普通PCR试剂购自大连宝生生物公司。

    1.3 DNA的提取刮取少许菌落于灭菌水中并配制成1个麦氏浊度的菌悬液，接着取1ml菌悬液至1.5ml微量离心管中 ......