孔小祥，仲崇明

    (连云港市中医院检验科，江苏 连云港222004)

    实时荧光定量PCR检测HBV-DNA测量不确定度的评定

    孔小祥，仲崇明

    (连云港市中医院检验科，江苏 连云港222004)

    目的 探讨实验室实时荧光定量PCR检测HBV-DNA测量不确定度的评定方法，并对其临床应用进行分析评价。方法 依据CNAS-TRL-001：2012《医学实验室——测量不确定度的评定与表达》，以室内质量控制评定实验室测量复现性，以有证参考物质(CRM)评定偏倚，以测量复现性和偏倚评定测量不确定度。结果 高、中、低值扩展不确定度(k=2)分别为0.99、1.14、0.94(对数值)，相对扩展不确定度(k=2)分别为9.15%、24.7%、31.1%。结论 以复现性和偏倚评定HBV-DNA测量不确定度方法有效可行，适合实验室测量不确定度的评定，适合实验室之间测量不确定度的比较分析。

    测量不确定度；乙型肝炎病毒DNA；实时荧光定量PCR

    乙型肝炎病毒(HBV)复制再活化起始于HBV复制的增强，HBV-DNA定量检测，可评估HBV复制的水平[1，2]，对于判断乙型肝炎病毒在体内的复制情况、判断治疗时机以及药物治疗效果监测等都有着重要意义。随着实时荧光定量PCR应用于HBV-DNA定量检测，二级以上医院广泛开展。实验室方法学性能验证或评价、实验室结果分散性的评定，都是实验室质量管理的重要内容。测量不确定度是检测结果分散性的最好表示，同时也是溯源性的表示，ISO15189 2012也阐述了不确定度的作用与要求。本文参照CNAS-TRL-001：2012《医学实验室——测量不确定度的评定与表达》，按“从上到下”的评定方法，利用室内期间不精密度、偏椅(引用标准物质)等数据，对实时荧光PCR定量检测HBV-DNA测量不确定度作评定。

    1 材料与方法

    1.1仪器与试剂TL-988荧光定量基因扩增仪(西安天隆科技有限公司)；GL-16G-Ⅱ高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；GL-15金属恒温器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)。试剂及HBVDNA定量校准品 (上海复星长征医学科学有限公司产品，批号：20150315)。

    1.2标准物质北京康彻思坦生物技术有限公司产品，国制标物证书分别为：GBW(E)090137、GBW(E)090138、GBW (E)090139，成品批号：201502001、201504002、201502001，靶值(对数值及参考范围)分别为：1.40×103IU/ml(3.15 ......