周梦怡，勇强，徐莉

    (1、南京林业大学 现代分析测试中心，江苏 南京210037；2、南京林业大学 化学工程学院，江苏 南京210037)

    细胞培养无菌技术及有效控制污染的措施

    周梦怡1，勇强2，徐莉1

    (1、南京林业大学 现代分析测试中心，江苏 南京210037；2、南京林业大学 化学工程学院，江苏 南京210037)

    细胞培养技术是分子生物学研究中的重要手段，现已广泛应用于生物学、医学等多个领域。而无菌技术又是细胞培养技术中的关键性技术。简要地介绍细胞培养时常见的污染物，并结合在实际工作中总结出来的经验，着重讨论污染途径及对应的有效控制措施，为细胞培养操作者提供参考。

    细胞培养；无菌技术；污染

    为了避开正常体内自体调节以及实验应激所可能产生的机体整体因素的影响，在20世纪初，出现了一种研究动物细胞的方法——组织培养[1]。组织培养包括了器官培养和细胞培养。特别是细胞培养，自20世纪后半叶开始，在生物学、医学等多个领域，发挥出了日益重要的作用[2，3]。

    细胞培养是指经酶的、机械的或化学的方法将组织或原代外植块的细胞分散开来，使呈细胞悬液，然后将其培养于固体基质上贴壁生长，或使其在培养基中悬浮生长[4]。由于细胞是在模拟体内生理环境等特定的体外条件下进行生长，缺乏机体的免疫系统等机制，因此细胞培养工作除了需要完善的实验设计和技术方法外，成败的关键还在于能否保持无菌状态、战胜多种来源污染的挑战。这就要求细胞培养操作者不仅要清楚细胞培养时潜在的污染物，还要掌握对应的控制措施。

    1 污染物[5-7]

    细胞培养时可能的主要污染源有三类：化学污染、细胞交叉污染和微生物污染。化学污染在细胞培养过程中发生率低。同一时期内进行多种细胞培养时可能会出现细胞交叉污染的情况，造成培养的细胞不纯。微生物则是细胞培养时最常见的污染物。如何有效的控制微生物污染，是细胞培养的重要问题。造成细胞污染的常见微生物种类有细菌、真菌和支原体。

    1.1细菌污染细菌是一种原核细胞微生物，常见的细菌污染主要由大肠埃希菌、枯草杆菌、假单胞菌、葡萄球菌等引起。通常在发生细菌污染后，培养基会变浑浊，pH会变低，细胞的生长被抑制，甚至死亡。在10×物镜下可观察到细胞间的空隙有点状颗粒。

    1.2真菌污染真菌是一种真核细胞微生物，个体比细菌大。污染培养细胞的多为烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。被真菌污染后，培养基pH会发生改变，表面可出现肉眼可见的、白色或浅黄色漂浮物 ......