陈敦雁，黄毅，邱福南，伍严安，黄肖利，李峰，吴文冰

    (福建医科大学省立临床医学院，1、检验科；2、肝胆外科；3、病理科，福建福州350001)

    eEF1A2基因沉默的原发性肝细胞癌BEL-7402细胞株的建立

    陈敦雁1，黄毅1，邱福南2，伍严安1，黄肖利1，李峰3，吴文冰1

    (福建医科大学省立临床医学院，1、检验科；2、肝胆外科；3、病理科，福建福州350001)

    目的本研究旨在构建针对高表达真核翻译延长因子1A2(eEF1A2)的原发性肝细胞癌(HCC)BEL-7402细胞株的eEF1A2-RNAi的细胞模型，为从基因沉默基因敲除层面研究eEF1A2在HCC潜在的致癌作用的功能奠定实验基础。方法通过针对eEF1A2基因的shRNA与线性化的GV115-GFP载体进行连接转化，对获得的重组子(GV115-GFP-eEF1A2-shRNA)进行PCR和测序鉴定。采用慢病毒载体系统将pHelper 1.0载体、pHelper 2.0载体与GV115-GFP-eEF1A2-shRNA共转染293T细胞，包装成eEF1A2-RNAi-LV，并感染高表达eEF1A2的BEL-7402细胞。采用Real time PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平验证eEF1A2-RNAi-LV对BEL-7402细胞eEF1A2表达的抑制作用。结果成功构建了重组真核表达载体GV115-GFP-eEF1A2-shRNA，并通过慢病毒载体系统包装成eEF1A2-RNAi-LV；将eEF1A2-RNAi-LV转染至BEL-7402细胞后，细胞eEF1A2 mRNA和蛋白的表达水平分别下降了84.1%和64.5%，与阴性对照组相比较具显著性差异(P<0.01)，表明转染后的BEL-7402细胞eEF1A2基因被特异性沉默。结论成功构建了eEF1A2-RNAi的BEL-7402细胞模型，为进一步从基因敲除层面研究eEF1A2在HCC潜在的致癌作用奠定了良好的实验基础。

    真核翻译延长因子1A2；原发性肝细胞癌；BEL-7402细胞；RNA干扰；慢病毒载体

    传统观念上人类真核翻译延长因子1A(eEF1A)被认为是管家蛋白，具有两种异构体：eEF1A1与eEF1A2，参与蛋白质翻译过程肽链的延长。但随着研究的深入，发现eEF1A具有促进细胞骨架重排、细胞增殖、核内转录活动的作用，并可参与磷脂酰肌醇、钙等信号转导途径的调节[1]。这种多功能蛋白的特性使eEF1A具有潜在致癌作用，尤其表达具有组织特异性的eEF1A2被发现在多种肿瘤中存在着异位高表达[2-5] ......