牛鑫，张国威，汪泱

    (上海交通大学附属第六人民医院，1、四肢显微外科研究所；2、神经外科，上海200233)

    ·论 著·

    人类尿液来源干细胞的体外培养和生物学特性分析

    牛鑫1，张国威2，汪泱1

    (上海交通大学附属第六人民医院，1、四肢显微外科研究所；2、神经外科，上海200233)

    目的 从人类尿液中直接分离能够体外大量扩增且具有多向分化潜能的干细胞，并研究其生物学特性。方法 收集志愿者尿液100～200ml，经离心后使用完全培养基重悬，接种于培养板中；克隆贴壁生长后换液。大量扩增后通过流式细胞术检测其表面标志物，使用成骨、成软骨诱导培养基对其进行诱导分化，通过茜素红染色、阿利新蓝染色检测诱导分化结果。结果 每100m l尿液经14d培养能够直接分离得到3～10个克隆，传代培养至第5代时可扩增至2～10×107个尿液来源干细胞，能够满足细胞治疗需要。尿液来源干细胞表面标志物CD29，CD44，CD73，CD90为阳性，CD34，CD45，HLA-DR为阴性，与间充质干细胞一致。经诱导培养后，尿液干细胞能够能够成骨、成软骨分化。结论 尿液来源干细胞具有间充质干细胞特性，可以作为细胞治疗、组织工程中的种子细胞。

    尿液来源干细胞；间充质干细胞；种子细胞

    细胞治疗是攻克危重疾病、修复难愈合损伤的新型疗法。干细胞因其增殖能力旺盛，具有多向分化潜能、能够分泌多种因子等生物学特性通常被选为细胞治疗的种子细胞。种子细胞的来源和培养是长期以来限制细胞治疗发展的关键因素。目前，可用于细胞移植疗法的种子细胞主要为胚胎干细胞、诱导多能性干细胞和骨髓、脂肪等多种组织来源的间充质干细胞 (mesenchymal stem cells，MSCs)。胚胎干细胞来源有限，培养方法复杂，面临伦理、成瘤问题以及异体移植的免疫排斥风险[1]；诱导多能性干细胞诱导、培养过程复杂，且有成瘤风险；骨髓、脂肪来源的间充质干细胞因其可以自体取材、成瘤风险低、且免疫排斥风险低，在细胞治疗中具有一定优势，并被广泛研究。例如，经研究证实，骨髓来源间充质干细胞能够在体外直接分化为神经元[2]；在体内实验中，骨髓来源间充质干细胞能够迁移至缺血半影区[3]。此外，骨髓来源间充质干细胞还能够促进血管生成[4，5]，抑制凋亡[6]，分泌营养因子[7]。将骨髓来源间充质干细胞自体移植，能够显著促进糖尿病足坏死创面的愈合[8]。但是，骨髓、脂肪来源间充质干细胞取材过程有创，给病人造成额外痛苦和负担。因此，寻找来源无创的移植种子细胞一直是干细胞研究领域持续关注的热点问题 ......