付倩 ，文奇 ，周银古 ，刘琴 ，宋利军 ，熊英 ，李建雄

    流感病毒属于正黏病毒科的单负链RNA病毒，按照核蛋白抗原的不同可分为甲、乙、丙三型，其中以甲型流感病毒危害最大，曾经引起至少4起世界流感大流行[1]。甲型流感病毒基因组由8个节段组成，其中第7个节段为M基因，编码M蛋白。M蛋白是除血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)外第3种跨膜蛋白[2]，可分为M1、M2蛋白，分别在稳定病毒包膜机构、构成离子通道功能方面发挥重要作用。本文通过对新余市2013年-2015年甲型流感病毒M基因进行测序分析，获取甲型流感病毒M基因进化以及烷胺类药物耐药性等信息。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源 收集流感监测哨点医院流感样病例和疑似流感暴发疫情病例的咽拭子标本。

    1.2 病毒分离 采用狗肾传代细胞(MDCK)进行病毒分离，根据细胞病变和微量血凝试验(HA)来判断病毒是否存在，将HA≥1：8的标本采用血凝抑制试验 (HAI)进行流感病毒型别鉴定，MDCK细胞、标准抗血清分别由江西省疾控中心、国家流感中心提供。

    1.3 毒株选择 随机选择新余市2013年-2015年分离到的甲型流感毒株，进行基因扩增和测序，其中新型H1N1病毒14株、H3N2病毒16株，所有毒株均经国家流感中心复核鉴定。

    1.4 RNA提取 按照QIAGEN公司的RNeasy Mini Kit试剂盒(Cat.No：74106，Lot No：145022097)操作说明书，从流感毒株中提取病毒核酸。

    1.5 M基因扩增 采用QIAGEN公司的One Step RT-PCR Kit 试 剂 盒 (Cat.No：210212 ......