张丽琴，管海宁，肖作淼，刘聪，肖九长，邹淑慧

    (赣州市人民医院检验科，江西 赣州 341000)

    阴沟肠杆菌是一种常见的条件致病菌，可导致伤口、呼吸道、泌尿道的严重感染，且多为医院内感染[1]。随着治疗多重耐药阴沟肠杆菌的碳青霉烯类抗生素在临床的广泛使用甚至滥用，导致碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌的检出逐年增多，给临床的感控和治疗带来了重重困难。阴沟肠杆菌对碳青霉烯类耐药主要是产生碳青霉烯酶[2]，但多种耐药机制可协同作用，造成阴沟肠杆菌耐药水平高及多重耐药的现象[3，4]。本研究对收集的碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌菌株采用改良Hodge试验进行碳青霉烯酶表型确证，利用PCR扩增技术检测目标菌株的碳青霉烯酶基因型和主动外排系统的AcrAB-TolC基因型，分析相关临床感染资料，为临床合理用药及院感防控提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 菌株来源 2012年1月至2015年12月本院临床标本中分离的经Vitek 2 compact鉴定药敏的碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌76株，剔除同一患者的重复菌株。质控菌株：大肠埃希菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853。

    1.2 主要仪器及试剂 法国梅里埃公司生产的Vitek 2 compact全自动微生物鉴定药敏分析系统及配套的GN、AST-GN16卡；PCR扩增仪为德国艾本德公司产品；琼脂糖凝胶电泳仪为美国博乐公司产品；凝胶成像系统为法国VILBER公司产品。细菌基因组DNA提取试剂盒购自北京索莱宝科 技 有 限 公 司 ；Taq DNA Polymerase cat.No.：B500010 (内 含：10×buffer、Mg2+、Taq DNA Polymerase)和dNTP购自上海生工生物工程有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 改良Hodge试验 按照美国临床实验室标准化协会 (CLSI)M100-S24进行[5]，将大肠埃希菌ATCC 25922调制成0.5麦氏浊度后再用生理盐水稀释10倍涂布于MH平板，中间贴厄他培南(10μg)纸片，用接种环挑取受试菌自纸片外缘向平板边缘划线接种，35℃孵育过夜，厄他培南抑菌圈处出现矢状生长者为待检菌产碳青霉烯酶。

    1.3.2 PCR检测目标基因 阴沟肠杆菌DNA的提取严格按照试剂盒说明书进行。所有引物由上海生工生物工程公司合成 ......