肖伟强，潘军，姚新伟，常彦敏，孙明月，许青霞，周丽莉

    (郑州大学附属肿瘤医院检验科，河南 郑州 450000)

    无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)是 B组链球菌 (Group B Streptococcus，GBS)唯一的一个种，是造成孕产妇生殖道感染的重要原因，严重时更可引起泌尿系感染、绒毛膜羊膜炎、产褥感染、新生儿感染等[1，2]。目前无乳链球菌的检测方法有传统培养、乳胶凝集实验、免疫层析、实时荧光定量PCR和环介导恒温恒温扩增 (loop-mediated isothermal amplification，LAMP)的方法等。LAMP 由日本科学家Notomi发明[3]，反应只需要把基因模板、引物、链置换型DNA合成酶、基质等共同置于一定温度下 (60～65℃)，可在15~60min内实现109~1010倍的扩增，最后形成具有颈环结构长短不一的多个双链DNA。LAMP扩增效率高，操作简单，特异性强，底物检测方便，广泛用于细菌类病原微生物的现场检测。无乳链球菌特异性靶基因主要有cfb基因、16S rRNA、16S-23srRNA基因的间隔区和scpB和ssrA基因等[4]。BLAST比对证明无乳链球菌和停乳链球菌16S rRNA相似度超过95%，仅在个别位点有差异，引物设计较难，因此很少有人把16S rRNA作为LAMP扩增GBS的靶基因。本文欲在此设计引物，一方面来探讨以16S rRNA为靶基因来检测GBS的可行性，另一方面来检验LAMP方法对序列极其相似的靶基因的区分能力。

    1 材料与方法

    1.1 菌株及来源 无乳链球菌标准菌株55191购自ATCC，其余52株无乳链球菌和其他131株非无乳链球菌(包括化脓链球菌12株、停乳链球菌停乳亚种11株、停乳链球菌似马亚种23株、马链球菌6株、咽峡炎链球菌10株、粪肠球菌20株、中间链球菌3株、牛链球菌4株、屎肠球菌26株、金黄色葡萄球菌7株、铅黄肠球菌9株)均来自我室不同时期临床的分离株。所有无乳链球菌、停乳链球菌停乳亚种、停乳链球菌似马亚种均再次经过16S rRNA通用扩增测序后比对确证，方法见文献[5]。

    1.2 仪器与试剂 Bst DNA聚合酶、dNTPs、DNAMarker、细菌总DNA提取试剂盒均购自大连宝生物，金属浴和凝胶成像系统购自美国Bio-Rad公司 ......