董桂香，王爱国，王雷鸣

    (郑州市骨科医院，河南 郑州 450052)

    肌酸激酶是人体生物体内能量代谢的关键酶，在生物体内一些关键耗能的细胞和组织中均存在分布，肌酸激酶的四种同工酶主要以二聚体形式存在，且脑型肌酸激酶在许多疾病诊断中得到广泛使用[1，2]。人体基因组中由于单个核苷酸发生变化，导致DNA序列产生多样性，临床将其称为单核苷酸多态性(SNP)[3，4]。 SNP 在人体中含量相对较高，并且分布较广，具有一定的遗传性，并且其表达水平与人脑肌酸激酶活性有关，能在一定程度上影响人脑型肌酸激酶结构、功能等，诱导期能力代谢异常[5，6]。本研究旨在探讨人脑型肌酸激酶SNP突变体二体解离与活性的关系，现将研究结果简要报告如下。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 选取2013年12月-2016年12月医院采集有人脑部组织的患者50例，男28例，女22 例，年龄 38～62 岁，平均(45.64±4.53)岁。疾病类型：24例脑梗死，16例脑出血，10例颅脑外伤。入选患者均符合1996年全国第四届脑血管病学术会议中关于脑血管疾病临床诊断标准[7]，均经过生化指标、头颅CT检查或MRI得到确诊。不同患者性别、年龄、疾病类型比较差异无统计学意义。

    1.2 方法 ⑴测定原理。采用pH-比色法测定标本组织中肌酸激酶的活性，并对肌酸激酶的底物进行反应动力学试验。肌酸激酶在催化正向反应时会随着ATP向肌酸上转移磷酰基的同时产生相同摩尔的氢离子，其最适宜的pH为7.5～9.0，属于一个宽阔的平台状。在该范围内测定氢离子的生成速度可以作为酶活力的测定指标。⑵脑型肌酸激酶SNP突变体的裂解与分离：取获得的人脑部组织，加入5mmol/L乙醇，保证溶液PH值为7.5，加入50mmol/L Tris-HCL液支撑匀浆，15min离心，速度为31000r/min，去除沉淀，获得上层清液I；在磁力搅拌下缓慢加入预冷的浓度为95.0%乙醇，保证溶液溶度为50.0% ......