卜克，王璐，王伟，张晶芳，刘林刚

    (郑州大学第五附属医院，河南 郑州 450052)

    脓毒症作为各种因素导致的全身性炎性反应综合症，可累及多个系统和器官，是导致患者死亡的重要因素[1]，其中脓毒症患者继发急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)是常见的严重并发症，发生率高达40%～70%[2]，死亡率更是超过了70%[3]，严重威胁患者生命安全。有研究指出，若能早期发现并采取有效措施阻止脓毒症继发AKI患者肾功能不可逆性损伤，可减少患者死亡。硫化氢(hy-drogen sulfide，H2S)作为一种新型气体信号分子，具有多种生物学活性，与多种疾病发生密切相关[4]，可通过抗炎、抑制氧化应激反应而减少机体损伤[5]，有研究指出[6]，H2S可通过抑制氧化应激减轻肾脏缺血再灌注损伤。本研究拟探讨外源性补充H2S对脓毒症大鼠AKI保护作用，并探讨可能的机制，以期为临床早期干预脓毒症继发AKI提供基础资料。

    1 资料与方法

    1.1 主要仪器与试剂 凝胶电泳影像分析系统(美国 Bio-rad)；脂多糖(LPS，规格 10mg)和 NaHS(美国 Sigma 公司)；血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)；白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)检测试剂盒(美国R&D公司)；HE染色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)；TUNEL试剂盒 (美国Roche公司)；兔抗鼠Caspase-3多克隆抗体(美国CST公司)；兔抗大鼠 Bcl-2、Bax单克隆抗体 (美国 Santa Cruz公司)。

    1.2 实验动物及分组 清洁级健康雄性SD大鼠40只购自河南省实验动物中心 (合格证号：SCXK(豫)2010-0002)，6～8 周龄，体重(200±20)g，饲养于标准实验室，自由进食、饮水。所有动物编号后，利用随机数字表随机分为假手术组、模型组、生理盐水组和H2S干预组，每组10只。

    1.3 大鼠脓毒症急性肾损伤模型制备及分组处理参照文献[7]中介绍的盲肠结扎穿孔法制备脓毒症急性肾损伤模型。取各组大鼠，禁饮禁食10h，利用10%水合氯醛腹腔麻醉，取仰卧位固定，备皮消毒，取腹中线切口开腹，将肠系膜和盲肠充分游离后，用4号无菌丝线在回盲瓣以下进行环形结扎，使用20号针头在盲端部进行贯通穿孔，挤出少量粪便后，放回腹腔，关腹，逐层缝合。以术后30min时出现精神萎靡、活动减少、毛发失去光泽、呼吸急促、喜饮水、解稀便作为模型成功标志 ......