文奇 ，周银古 ，付倩 ，敖冬生 ，熊英 ，施勇

    (1、新余市疾病预防控制中心，江西 新余338000；2、江西省疾病预防控制中心，江西 南昌 330029)

    流感病毒分为甲型(A)、乙型(B)和丙型(C)，字母不仅反映了病毒被发现的时间顺序，更反映了对人类的危害程度。目前人类A型流感中，新H1N1亚型自2009年秋季取代原有的季节性H1亚型后，与H3N2亚型共同成为A型流感的流行株。B型流感病毒不分亚型，但根据其抗原性和基因特征可以分为不同抗原谱系。自1983年以来，B型流感病毒分为两个系：B-Victoria系和B-Yamagata系，代表株分别为B-Victoria/2/87和B-Yamagata/16/88，且两个系流感病毒在全球共同流行[1]。C型流感以散发形式存在，主要侵袭婴幼儿，一般不引起流感流行[2]，因此没有列入流感监测范围。本文就日常监测中现存时间较长的H3N2亚型和B型流感病毒作为研究对象，通过NA基因序列分析法来阐述新余地区2013-2015年H3N2、B型流感病毒NA基因特性，为新余地区流感的预防控制及临床治疗提供参考依据。

    1 材料与方法

    1.1 毒株来源 选择来自2013年-2015年不同时间内流感监测医院或流感暴发疫情病例咽拭子标本中分离到的 10株 H3N2、8株 B型 Victoria系(简称 BV)、15株 B型 Yamagata系(简称 BY)流感病毒进行基因扩增和测序，所选毒株均经国家流感中心HA血凝抑制试验复核确认。

    1.2 病毒RNA提取 采用德国Qiagen公司的RNeasy Mini Kit 试 剂 盒 (Cat.No：74106，Lot No：145022097)说明书提取病毒RNA。

    1.3 RT-PCR扩增NA基因 采用QIAGEN One Step RT-PCR Kit试剂盒进行RT-PCR反应，NA引物及反应条件参照相关文献[3]，在BIO-RAD PTC-200仪器上进行扩增。

    1.4 核苷酸序列测定 RT-PCR产物送上海生工生物工程技术服务有限公司进行纯化和双向测序。

    1.5 序列分析 采用DNAStar5.0、Mage5.0序列分析软件(包)对测序文件的双向序列进行拼接、对比和遗传进化分析，选取2012年-2014年北半球疫苗推荐株A/Vitorvia/361/2011(H3N2)、2014年-2015年北半球疫苗株 A/Texas/50/2012(H3N2)、2009年-2012年北半球疫苗株B/Brisbane/60/2008(BV)、2012年-2013年北半球疫苗株B/Wisconsin/01/2010(BY)、2013年-2015年北半球疫苗株B/Massachusetts/02/2012(BY)作为对比毒株 ......