杜芳玲，王婷婷综述；刘洋，万腊根校审

    (1、南昌大学公共卫生学院，江西 南昌 330006；2、南昌大学第一附属医院，江西 南昌 330006)

    1 LAMP技术特征

    1.1 LAMP原理 环介导等温扩增技术针对靶基因的6个区域设计4条特异引物，利用一种链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在恒温条件下(65℃左右)保温约60min，即可完成核酸扩增。

    1.2 扩增产物的检测方法 目前应用较广泛的有以下三种方法：⑴目测或浊度检测：通过对扩增过程中产生的副产物-焦磷酸镁沉淀来检测判断有无扩增产物；⑵荧光检测：在反应液中加入SYBR GreenΙ，可在紫外灯下通过肉眼判定；⑶电泳检测：由于扩增后的产物是一系列反向重复的靶序列构成的茎环结构和多环花椰菜结构的DNA片段混合物，电泳后在凝胶上显示不同大小区带的阶梯式图谱

    1.3 LAMP的技术特点 ⑴快速、高效。不需要预先的双链DNA的热变性，避免了温度循环而造成的时间损失。⑵高灵敏度。对某些病原体的扩增，模板只要几个拷贝数，与PCR相比高出几个数量级。⑶高特异性。针对靶序列的6个区域设计的4种特异性引物，6个区域中如有一处与引物不匹配均不能进行核酸扩增。⑷产物检测方便。LAMP在合成DNA的过程中会产生大量的焦磷酸根离子，能与镁离子结合生成白色的焦磷酸镁沉淀，因此可以根据反应体系中是否生成白色沉淀来判断反应的进行情况。⑸操作简单。LAMP反应只需要一个简单的恒温器，水浴锅、金属浴均可完成此实验，并不需要昂贵的仪器，可操作性强。

    2 研究进展

    2.1 难培养病原微生物的检测 由于传统病原微生物的分离、培养、鉴定往往操作程序繁琐，等待结果时间较长，而LAMP克服了这些缺点能在传统培养病原微生物检测中发挥优势。与此同时，部分致病菌受培养条件的限制而不易检出，则更促进了LAMP技术在这类难培养病原体的检测取得了较大进展，已出现很多报道。

    结核分枝杆菌采用固体培养基分离培养耗时长易混入其他细菌，直接涂片染色镜检极易漏诊，因此IWAMOTO[1]等根据gyr B基因序列设计针对结核分枝杆菌的引物，用LAMP方法从痰标本中鉴定结核分枝杆菌，通过检测24株分枝杆菌和7株非分枝杆菌证实了LAMP法的特异性和敏感性。刘畅[2]等针对艰难梭菌毒素A基因设计引物建立LAMP法与荧光定量PCR对比 ......