田耘博，魏兰，李维，欧阳熊妍

    (重庆市血液中心，重庆 400015)

    血液病毒核酸检测(nucleic acid testing，NAT)直接检测病毒核酸，与酶联免疫吸附法(ELISA)相比能缩短血液病毒检测的窗口期，更好地保障血液安全，已成为许多国家血液筛查病毒的必要手段[1，2]，目前我国也已全面开展血液病毒核酸检测[3]。标本采集、处理、保存等因素对保证NAT检测结果的准确性尤为重要[4]。若标本采集、处理不当可能导致溶血，血浆中Hb可能会影响血液病毒核酸检测的有效性和准确性[5-7]。如果实验室一概拒收溶血标本，重新采集标本可能会非常困难，甚至会影响血液的有效及时供给，产生或增大血液供给矛盾。从母袋内重新留样进行ELISA和NAT检测，有可能因抗凝剂的稀释造成弱阳性标本漏检[8]；除了稀释的影响外，母袋重新留样还可能面临核酸降解及污染的问题。因此，探讨标本溶血对NAT检测结果的影响意义重大，可为实验室提供可接受的溶血范围，保护珍贵的血液资源。

    目前应用于血液病毒筛查的NAT技术主要有多聚酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)技术和转录介导的扩增(transcription mediated amplifi-cation，TMA)技术[2]。PCR是最早应用的核酸扩增技术，但随着NAT在全世界的成功推广，TMA在NAT中的应用范围已不亚于PCR[9]。调研文献发现，目前国内外尚无标本溶血对基于TMA技术的NAT检测结果影响较为详细的研究。因此，本研究旨在通过建立梯度溶血程度和梯度病毒载量的标本模型，分析含不同病毒载量的系列溶血程度标本的NAT结果，探讨溶血对血液病毒核酸检测的影响，以明确溶血程度与NAT灵敏度之间的关系，为实验室提供可接受的溶血范围，保护血液资源，以促进临床输血检验技术发展。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源及筛选 收集重庆市血液中心2017年5月-2017年7月经体检和血液初筛检验合格的无偿献血标本500份，分别用含分离胶的“非可替”抗凝真空管(含EDTA-K2喷雾干粉)采集6～8ml全血用于NAT检测；“BD”抗凝真空采血管(含EDTA-K2喷雾干粉)采集4～5ml全血用于ELISA检测。采集后的标本管置于4℃保存，在采集4～6h内2000g离心15min，检测前置于4℃保存，分别进行ELISA和NAT。挑选ELISA和NAT均为非反应性的标本，封口胶密封后4℃保存，1周内使用。本研究方案获得重庆市血液中心伦理委员会的批准。

    1.2 主要仪器 TEKEN RSP150/200型全自动加样仪(瑞士TEKEN公司)和FAME 2420/30全自动酶免 分 析 仪 (瑞 士 HAMILTON公 司 )、Procleix TIGRIS全自动核酸检测分析系统 (西班牙盖立复公司)及配套的PRI(试剂准备温育器 ......