缑丽莎，郑贝贝，齐亚丹，张翼

    (周口市中心医院内分泌科，河南 周口466000)

    糖尿病是一种糖、蛋白质、脂肪等代谢紊乱的慢性疾病，糖尿病主要是由于机体内的胰岛素不足引起的，β细胞是一种内分泌细胞，其具有分泌胰岛素的作用，胰岛β细胞分泌胰岛素主要受到血糖的影响[1,2]。研究表明，胰岛β细胞过度凋亡引起的胰岛β细胞功能异常是糖尿病胰岛β细胞损伤发生的重要原因之一，探讨高糖环境下胰岛β细胞损伤机制对于研究糖尿病的发病机制具有重要意义[3]。程序性细胞死亡4(programmde cell death 4,PDCD4)是一种新发现的抑癌基因，其参与调控蛋白质翻译、基因的转录过程，在细胞程序性死亡过程中发挥促进作用[4]。近年来的研究显示，PDCD4参与糖尿病发生过程，与高糖环境下的心肌细胞、血管内皮细胞等细胞损伤发生有关[5-7]。本研究通过下调胰岛β细胞中PDCD4的表达水平，探讨敲低PDCD4在高糖诱导的胰岛β细胞损伤中的作用，为明确糖尿病胰岛β细胞损伤机制提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料 胰岛β细胞INS-1购自武汉普诺赛(Procell)生命科技有限公司;PDCD4 siRNA重组慢病毒、阴性对照慢病毒由吉满生物科技(上海)有限公司构建；GAPDH、PDCD4引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成；Realtime PCR试剂盒(SYBR Green)购自上海索宝生物科技有限公司；丙二醛(malonaldehyde，MDA)含量检测试剂盒、超氧化物歧化酶 (Superoxide Orgotein Dismutase,SOD)含量检测试剂盒购自东仁化学科技(上海)有限公司；胰岛素含量检测试剂盒购自北京利维宁生物科技有限公司；活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)抗体购自美国CTS。

    1.2 慢病毒感染和分组 INS-1细胞接种到12孔细胞培养板内，细胞密度为35%左右时，取慢病毒液，添加到细胞中，感染复数为10，同时添加Polybrene(终浓度为 6mg/L)，放在 37℃，5%CO2 培养箱内培养过夜，将病毒液吸弃，加入完全培养液，观察细胞融合度为90%，观察绿色荧光表达情况，感染效率高于90%。分别取稳定感染PDCD4 siRNA重组慢病毒、阴性对照慢病毒的INS-1细胞用含有25mmol/L葡萄糖的细胞培养液培养依次记为干扰组、阴性对照组 ......