周丹，何进才，黄涛，李惠贞，张德明，谷大伟，罗胜华

    (深圳市中医院检验科,广东 深圳 518033)

    新冠肺炎(corona virus disease 19,COVID-19)是由新型冠状病毒[1，2](severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2,简称新冠病毒)感染所致的肺部炎症，人群普遍易感，自2019年12月在武汉被发现以来，迅速蔓延至全中国乃至全球，截至2月28日24时，31个省(自治区、直辖市)以及新疆生产建设兵团累计确诊病例79251例[3]。新冠病毒是冠状病毒β属的新成员，属于单链RNA病毒，可引起人类呼吸道感染，其基因特征与重症急性呼吸综合征(SARSr-CoV)和中东呼吸综合征(MERSr-CoV)有明显区别[4]。新冠肺炎诊疗方案(试行第六版)中提到，病原学证据是新冠肺炎诊断的金标准。临床病例或疑似病例具备实时荧光RT-PCR新冠病毒核酸阳性或病毒基因测序与已知的新冠病毒高度同源,即为确诊病例[4]。然而病毒测序对实验室技术、人员、设备等要求较高，因此荧光RT-PCR是目前新冠肺炎确诊中使用最广泛的方法。现将实时荧光RT-PCR在本院病例检测中的应用情况及实践经验报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 病例来源 选取2020年1月30日-2020年2月28日就诊于本院发热门诊的患者 (包括发热患者、湖北旅居者以及密切接触者、外地返深人员),共 1844 例。

    1.1.2 试剂与仪器 试剂采用湖南圣湘生物科技有限公司生产的核酸提取试剂盒及新型冠状病毒核酸检测试剂盒。仪器使用安捷伦MX3000P荧光定量PCR仪和罗氏cobas z480荧光定量PCR仪。

    1.2 方法

    1.2.1 样本采集 采用预约模式集中采样,每天分两个时段，上午和下午各一批，由发热门诊经过生物安全培训合格并穿戴生物安全三级防护的医生进行采样，每个病例采集口咽拭子。对多次检测阴性或高度疑似的患者,由临床医生根据需要采集鼻咽拭子、肺泡灌洗液、痰液或肛拭子等。

    1.2.2 样本包装、运送及接收 样本采集后放入带螺旋盖有垫圈、耐冷冻的病毒保存管，拧紧，管外贴条形码。样本管喷洒75%酒精消毒后放入密封袋，每袋限一份样本。收集样本后竖置放于样本运送盒,盖紧盖子，置于感染性样本运输箱进行运输，运输箱上标明“新冠检测” ......