孙国平 ，马驰宇 ，朱鹏 ，薛雯 ，龚蔚蔚 ，欧明林 ，4

    (1.深圳市坪山区人民医院中心实验室，广东 深圳518118；2.广西师范大学生命科学学院，广西 桂林541004；3.中国人民解放军第九二四医院中心实验室，广西代谢性疾病研究重点实验室，广西 桂林541002；4.深圳市人民医院临床医学研究中心，广东 深圳 518020)

    石骨症是一种骨代谢异常疾病，也是一种典型的人类遗传病。近年来，DNA 测序技术的发展促进了人类遗传病致病突变点的发现[1]。目前，人类已发现数十个与常染色体显性遗传石骨症密切相关的CLCN7 突变位点，其中CLCN7(R286W)突变是最常见的致病突变位点之一,可见于40%以上的石骨症患者[2]。该病尚缺乏有效的治疗方法，参考遗传病研究领域最新研究进展,探索石骨症致病基因点突变修复方法具有重要的科学价值,但尚缺乏相关报道。因此，办研究针对较常见的致病突变点构建基因编辑载体,可能为石骨症致病基因CLCN7修复提供研究基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 质粒与菌株 CRISPR/Cas9 质粒购自北京赛贝生物技术有限公司，质粒图谱见图1。感受态细胞DH5α 购自天根生化科技(北京)有限公司。

    1.1.2 试剂 BspQ I 高保真限制性内切酶和T4 连接酶购自NEB 公司；DNA 凝胶回收试剂盒和质粒小提试剂盒及TOP10 感受态细胞购自天根生化科技(北京)有限公司；高保真PCR 酶购自宝日医生物科技(北京)有限公司 ......