李继峰

    (鹤壁市人民医院麻醉科，河南 鹤壁 458030)

    心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CF)占心肌组织细胞中的60～70%，对维持心脏正常的生理功能方面起着重要的作用[1-3]。 心肌纤维化是多种心血管疾病的病理表现，如心力衰竭、冠心病、高血压等，是导致心室重塑的主要因素[4，5]。 当心肌受到各种致病因素刺激后，会导致胶原合成增加并沉积，并最终发生心肌纤维化[6]。心肌胶原纤维主要包括Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白，当心肌成纤维细胞增殖时，会伴有胶原蛋白的过度沉积，这是导致心肌纤维化的主要原因[7]。 研究证实，血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，AngⅡ)是可导致心肌纤维化的主要因素，并会引起心肌成纤维细胞的增殖及胶原沉积，从而导致心肌纤维化[8]。 异丙酚是临床常用的麻醉诱导药物，并证实其具有抑制心肌收缩力、清除氧自由基以及保护心脏缺血等作用[9，10]。 但是，异丙酚对 AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响及作用机制，目前还不清楚。 因此，本研究通过采用Ang Ⅱ建立诱导新生大鼠CFb 纤维化模型，探讨异丙酚抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的机制，为异丙酚应用于冠心病心室重构、心肌纤维化的预防及治疗提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料与试剂 实验材料： 选取新生1～3d的Wistar 大鼠，取其心肌成纤维细胞进行原代培养及分离纯化，并保存与本实验室。 DMEM 培养基、胰蛋白酶和胎牛血清购自于美国Gibco 公司；二甲基亚砜(DMSO)和噻唑蓝(MTT)购自于美国Sigma公司；Ⅰ、Ⅲ型胶原的ELISA 检测试剂盒购自于欣博盛生物科技有限公司；BCA 蛋白浓度测定试剂盒及ECL 发光试剂盒购自碧云天生物科技有限公司；TGF-β1 抗体、ERK1/2 抗体、cPKCα 抗体和 βactin 抗体均购自abcom 公司； 其余为国产分析纯试剂。

    1.2 实验方法

    1.2.1 心肌成纤维细胞的原代培养及鉴定 选取新生1～3 d 的Wistar 大鼠，提取其心肌成纤维细胞并进行分离纯化。 Wistar 大鼠水合氯醛麻醉后处死，随后75%乙醇浸泡消毒，与超净台取心脏，无菌PB S 冲洗。 随后在大皿中取部分心肌，将取出的心肌于中皿中剪碎并转移至5ml 灭菌EP 管中， 加入4ml 的胰蛋白酶：I 型胶原酶比例为2：1 的混合液。水浴锅中37 度消化10 分钟， 随后静置2 分钟，随后提取上清液，再向其中加入等量的含血清DMEM培养基中和混合酶液的消化 ......